Supressió tumoral guiada per components caveolars en sarcomes pediàtrics
- Autores: Juan Huertas Martínez
- Directores de la Tesis: Óscar Martínez Tirado (dir. tes.), Isabel Fabregat Romero (tut. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2016
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Carles Enrich Bastús (presid.), Carmen de Torres Gómez-Pallete (secret.), Álvaro Aytes Meneses (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Medicina e Investigación Traslacional por la Universidad de Barcelona
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
Los caveolas son invaginaciones de la membrana plasmática de unos 100 nm de diámetro, relacionadas con la transducción de señales y el metabolismo de lípidos, entre otros. Sus componentes esenciales son Caveolina-1 (CAV1) y PTRF; ambas se han descrito como proteínas con un papel dual en la progresión tumoral. Aunque en tumores como los sarcomas pediátricos su papel aún presenta interrogantes. Estos tumores representan un grupo de sarcomas heterogéneo. En esta tesis se ha trabajado con el sarcoma de Ewing (SE) y el rabdomiosarcoma alveolar (ARMS), que se caracterizan por una alta capacidad metastásica y la presencia de una proteína de fusión, diferente para cada tipo, que guía la tumorogenicidad de estos dos sarcomas.
Previamente, nuestro grupo había descrito que CAV1 prácticamente no se expresaba en diferentes líneas de ARMS. En esta tesis se realizó un análisis más exhaustivo, con muestras de pacientes de ARMS, que reveló que la expresión de CAV1 era prácticamente inexistente y estaba silenciada por mecanismos epigenéticos. La reintroducción de CAV1 en diferentes líneas de ARMS tenía un fuerte papel supresor, promoviendo características de un fenotipo miogénico diferenciado e incrementando la tasa de muerte en condiciones de diferenciación. Este proceso estaba mediado por la defosforilación de ERK1/2 y la disminución de los niveles de FOXO1, proteínas importantes durante la diferenciación miogénica.
Por otro lado, el análisis del metiloma del SE nos reveló que existía una hipermetilación en genes relacionados con la diferenciación neural y esquelética, importantes en el desarrollo embrionario. Además, nos permitió observar la hipermetilación de zonas reguladores de otros genes, entre ellos PTRF, que presentaba hipermetilada una región cercana al promotor. Este gen da lugar a la proteína, PTRF, que junto con CAV1 es esencial para la formación de caveolas. Nuestro grupo había definido a CAV1 como un oncogén en el SE. Por ello analizamos por microscopía electrónica la presencia de caveolas en las líneas del SE. Éstas presentaban bajos niveles de caveolas, que incrementaban al tratarlas con el agente demetilante 5-aza-dC, que promovía la reexpresión de PTRF. La reintroducción de PTRF en líneas de SE producía un incremento en la formación de caveolas y en la apoptosis celular y una reducción en la capacidad clonogénica, sólo cuando se coexpresaba con CAV1. Esto, además, se traducía en una reducción de la tumorogenicidad in vivo. La formación de caveolas se ha relacionado con la activación de p53, las línias utilizadas eran wt para TP53. La reexpresión de PTRF en línias de SE mutantes para TP53 no tenía efectos sobre la muerte celular, aunque si reducía el número de colonias en el ensayo de clonogenia. En las células wt para TP53 se veía reducida la interacción MDM2-p53 por la presencia de PTRF. Finalmente, también comprobamos como el tratamiento con el agente 5-aza-dC sólo promovía la muerte celular en las células wt para TP53.
Con todo esto, en esta tesis se ha demostrado que los componentes caveolares ejercen un papel supresor de tumores en los sarcomas pediátricos. Por un lado en el ARMS estimulan procesos característicos de la diferenciación miogénica, regulando las vías de señalización que la promueven. Por el otro, PTRF promueve la formación de caveolas que secuestran CAV1 y acaba provocando la muerte celular en las células de SE por la activación de p53.
