Impacto clínico de las aberrancias inmunofenotípicas y perfil mutacional en síndromes mielodisplásicos

• Autores: Maria Teresa Cedena Romero
• Directores de la Tesis: Florinda Gilsanz Rodríguez (dir. tes.), R. Ayala Diaz (dir. tes.), Joaquín Martínez López (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2016
• Idioma: español
• Número de páginas: 182
• Tribunal Calificador de la Tesis: Ana Villegas (presid.), Javier de la Serna Torroba (secret.), Jaime Pérez de Oteyza (voc.), Ángela Figuera Álvarez (voc.), Mariano Provencio Pulla (voc.)
• Materias:
  • Ciencias médicas
    • Medicina interna
      • Hematología
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense (pdf)
• Resumen
  • español

    Los síndromes mielodisplásicos (SMD) constituyen un grupo heterogéneo de entidades clínicas. La citomorfología y la citogenética constituyen el estándar para el diagnóstico y pronóstico de pacientes con sospecha de SMD, aunque presentan ciertas limitaciones. Nuestro objetivo consiste en desarrollar una metodología de análisis por citometría de flujo para diferenciar entre pacientes con SMD y otros con citopenias de diferente origen, y evaluar la aplicabilidad de la técnica de secuenciación masiva de nueva generación (NGS) e investigar la utilidad para el diagnóstico molecular y pronóstico de estos pacientes. Para el análisis inmunofenotípico se seleccionaron 55 casos de SMD, y 51 controles con citopenias de diversos orígenes (sobre todo inmunes, hiperesplenismo, toxicidad farmacológica). El estudio molecular se realizó con el secuenciador Ion Torrent Proton (Life Technologies. Palo Alto, California). Se estudió el perfil mutacional de 106 SMD y de 12 controles, mediante secuenciación masiva paralela de 34 genes relacionados con patologías mieloides. La aplicación de la recomendación del grupo de trabajo de EuropeanLeukemia Net del análisis inmunofenotípico en nuestros pacientes y controles, nos permitió diferenciar a los pacientes con SMD mediante algunos parámetros consistentes. Evaluamos la herramienta de base de datos de maduración del software Infinicyt (Cytognos. Salamanca, España) como test diagnóstico para discriminar entre pacientes con SMD y otros con citopenias de origen no clonal, resultado un test diagnóstico fiable, y además con implicaciones pronósticas, correlacionando el número de alteraciones inmunofenotípicas con el riesgo pronóstico. En el análisis del perfil mutacional por secuenciación masiva se identificaron un total de 198 mutaciones puntuales en 94 de los 106 pacientes (88.7por ciento). Las mutaciones más frecuentes correspondieron a: TET2 (32,1por ciento), SF3B1 (17,9por ciento), ASXL1 (17por ciento), DNMT3A (14,2por ciento), TP53 (11,3por ciento), y RUNX1 (10,4por ciento), y el resto con frecuencias mayor o igual 0por ciento, resultados similares a los publicados en otras series. Encontramos cinco genes en los que el estado mutacional presentaba impacto en la supervivencia global (TP53, RUNX1, EZH2, KRAS, y U2AF1). Tanto estos genes como adicionalmente otros reconocidos con valor pronóstico (ASXL1, ETV6) marcaban un impacto negativo en la supervivencia, incluso estratificando según grupos de riesgo. En conclusión, tanto la citometría de flujo como la secuenciación masiva, no sólo nos ayudan en el diagnóstico de pacientes con SMD, sino que además aportan información pronóstica relevante que habrá que integrar en un futuro.

  • English

    The myelodysplastic syndromes (MDS) are a heterogeneous group of clinical entities. Cytomorphology and cytogenetics are standard for the study of patients with suspected MDS. However, there are still difficulties in establishing the diagnosis of MDS, especially in samples with a single cytopenia, without excess blasts. Cytogenetic abnormalities are a key prognostic factor and support at the time of diagnosis, although there are only changes in 30-50% of patients. Nowadays, new diagnostic tools (flow cytometry and molecular biology) can contribute not only diagnosis but also prognosis in patients with MDS. OBJECTIVE Develop a methodology for flow cytometry immunophenotyping that allows us to make the differential diagnosis between MDS patients with cytopenias of other sources. Evaluate the applicability of the next generation sequencing and high sensitivity (NGS) for molecular diagnosis and prognosis of patients with MDS. PATIENTS AND METHODS For immunophenotyping analysis by flow cytometry, 55 patients diagnosed of MDS, and 51 controls with cytopenias of several origins (immune, hypersplenism, drug toxicity) were selected. The recommendations of the working group from the European LeukemiaNet were applied to assess dysplasia by flow cytometry in different populations: myeloid blasts, lymphoid blasts, granulocytic, monocytic and erythroid cells. Furthermore, a database was designed for myeloid maturation using the Infinicyt® software...