Campylobacter spp. en granjas de pollos de engorde: diversidad genética, resistencia antimicrobiana y factores de virulencia /
- Autores: Guillermo Cantero
- Directores de la Tesis: Marta Cerdà Cuéllar (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2017
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Natàlia Majó i Masferrer (presid.), Virginia Aragón Fernández (secret.), Carlos Balsalobre Parra (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Medicina y Sanidad Animales por la Universidad Autónoma de Barcelona
- Materias:
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- Resumen
La campilobacteriosis es la zoonosis de transmisión alimentaria más comúnmente reportada en la Unión Europea (UE) desde 2005. La principal fuente de infección es el consumo o manipulación de carne de pollo contaminada con Campylobacter (principalmente C. jejuni y C. coli). La alta prevalencia de Campylobacter en pollos de engorde en granja supone un elevado riesgo de contaminación del producto final y por ende del riesgo de infección para el consumidor. Es por ello que para la UE es prioritaria la prevención y reducción del número de lotes positivos a Campylobacter en edad de sacrificio. De ahí la importancia de conocer en profundidad el comportamiento y la epidemiologia de este patógeno. De este modo, en el marco de esta tesis (i) se estudió la diversidad y dinámica de cepas de Campylobacter de pollos de engorde en granja; (ii) se caracterizaron los aislados desde el punto de vista de resistencia a un panel de antimicrobianos así como de genes de virulencia; (iii) se caracterizó en profundidad una selección de aislados mediante secuenciación masiva, analizando los mecanismos de resistencia, distribución de genes de virulencia, genotipo y relaciones filogenéticas. Los aislados objeto de estudio proceden de un estudio longitudinal previo, realizado durante dos años en cinco granjas de Cataluña. De aquellos lotes positivos a Campylobacter se conservaron una serie de aislados al azar de diferentes individuos a lo largo de cada crianza.
Para estudiar en profundidad la diversidad, estacionalidad y dinámica de cepas de Campylobacter circulantes en las granjas, se realizó la tipificación molecular de los aislados utilizando las técnicas de electroforesis en campo pulsado (PFGE) y multilocus sequence typing (MLST). Mediante PFGE y utilizando dos enzimas de restricción, se analizaron un total de 343 aislados (254 de C. jejuni y 89 de C. coli) y se identificaron un total de 92 perfiles diferentes de macrorestricción (de 12 a 24 perfiles por granja). Globalmente, detectamos una gran diversidad genotípica, identificando mayoritariamente entre 1 y 2 genotipos diferentes por crianza, pero que no se aislaron en crianzas sucesivas. Por otro lado, observamos persistencia de algunos genotipos dentro de un mismo lote a lo largo de la crianza. Al comparar los aislados de las diferentes granjas, encontramos genotipos comunes de C. jejuni entre diferentes granjas. De los diferentes genotipos obtenidos mediante PFGE, seleccionamos un total de 127 aislados (93 de C. jejuni y 34 de C. coli) que analizamos mediante MLST, encontrando igualmente una gran diversidad genética. Los aislados de C. jejuni se agruparon en 15 complejos clonales (CC) distribuidos en 34 secuencias tipo (ST), mientras que los aislados de C. coli se agruparon en su totalidad dentro del CC828 distribuidos en 12 STs. Además, identificamos cinco STs nuevos de C. jejuni y dos de C. coli. Se observó cierta estacionalidad en determinados CC. Los CC21 y CC206 se encontraban a lo largo del año, excepto durante el trimestre más frío, siendo más frecuentes en los meses más cálidos. Por otro lado el CC48 se observó únicamente en los meses más cálidos.
En el segundo estudio, evaluamos el perfil de susceptibilidad de 344 aislados frente a un panel de 12 antimicrobianos de diferentes familias, utilizando el método de difusión en disco. La resistencia a quinolonas (ácido nalidíxico y ciprofloxacina) fue la más prevalente, seguida de tetraciclinas. Esto representa un problema de salud pública importante puesto que éstos son los agentes más usados para tratar infecciones entéricas humanas. Por el contrario, las resistencias a eritromicina y gentamicina fueron las menos prevalentes. Todos los aislados analizados fueron sensibles a cloranfenicol, amoxicilina + clavulanato, imipenem y meropenem. Un 62,2% de los aislados fueron multiresistentes, siendo el perfil de resistencia más frecuente: ácido nalidixico, ciprofloxacina, enrofloxacina, tetraciclina, doxiciclina y ampicilina. Por otro lado, analizamos 14 genes de virulencia involucrados en la colonización e infección, donde observamos una distribución heterogénea de los mismos, en los aislados analizados. Cabe destacar la detección del gen wlaN en un 19% de aislados; este gen está relacionado con el síndrome de Guillain-Barré, un síndrome neurológico grave que puede desarrollarse tras una infección por Campylobacter.
En el último estudio se realizó la secuenciación del genoma completo, mediante la plataforma Illumina, de un total de 16 aislados de C. jejuni y C. coli para su caracterización en profundidad. La tecnología de secuenciación masiva se ha convertido en una herramienta potente, rápida y asequible para caracterizar patógenos de interés como Campylobacter en estudios epidemiológicos.
Los datos obtenidos en esta tesis confirman la diversidad genética de Campylobacter en los pollos de engorde y la gran complejidad de la dinámica de cepas circulantes en granja. Ello probablemente sea el principal factor que dificulta conseguir estrategias eficaces de control de la bacteria en granja. Por otro lado, la elevada proporción de cepas resistentes y multiresistentes a antibióticos, aisladas de pollos de engorde ponen de relieve la importancia de concienciar a los productores y/o encargados de la producción intensiva sobre el uso prudente de antimicrobianos. Unas medidas de bioseguridad efectivas para el control de Campylobacter en granja, no sólo conseguirían reducir la alta prevalencia de lotes positivos a edad de sacrificio, sino que indirectamente mejorarían el estatus sanitario general de la granja. Ello conllevaría una menor necesidad del uso terapéutico de antibióticos y probablemente una reducción de cepas resistentes.
