Estudio de los mecanismos de diseminación en leucemia linfática crónica: papel de Eph/ Ephrin

• Autores: Miguel Ángel Flores Villalobos
• Directores de la Tesis: Luis Miguel Alonso Colmenar (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2017
• Idioma: español
• Número de páginas: 217
• Tribunal Calificador de la Tesis: Eva Jiménez Pérez (presid.), Oscar Palomares Gracia (secret.), José Luís Rodríguez Fernández (voc.), Monica Ballesteros Andres (voc.), Ismael Buño (voc.)
• Programa de doctorado: Programa Oficial de Doctorado en Bioquímica, Biología Molecular y Biomedicina
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense (pdf)
• Resumen
  • español

    La leucemia linfática crónica (LLC), es un síndrome linfoproliferativo crónico de linfocitos B, considerada enfermedad incurable, por tanto es necesario un mejor conocimiento de los mecanismos celulares y moleculares de su patobiología. La colonización de ganglios linfáticos (GL) por las células leucémicas (LLC), provoca alteraciones inmunológicas presentes en los casos más graves de la enfermedad.

    En el presente trabajo demostramos que, la célula endotelial puede proporcionar señales de supervivencia a las células LLC en los tejidos infiltrados. Las células LLC, pero no los linfocitos B, pueden sufrir apoptosis a través de contactos físicos con endotelio sanguíneo (HUVEC) preestimulado con TNF alfa. Las integrinas CD49d y CD11a juegan un papel crítico con un efecto dual, intercambiando respuestas de apoptosis o supervivencia en las células LLC durante la migración trnasendotelial (TEM). Las células LLC de pacientes con linfoadenopatía (LApos) mostraron una mayor supervivencia en parte debido a expresión de integrinas alfa4 y alfaL.

    La expresión de ephrinA4 en membrana surge como un mediador para contrarrestar la apoptosis. Demostramos que la supervivencia y la apoptosis mediadas por las integrinas alfa4 y alfaL son contrarrestados por la señal reverse de ephrinA4, inhibiendo estados conformacionales de estas integrinas secuestrándolas físicamente en la superficie celular, disminuyendo la adhesión. El silenciamiento de ephrinA4 mejora la adhesión de células LLC al endotelio y la supervivencia en los casos LApos pero no en pacientes sin adenopatías (LAneg). Demostramos que la unión de ephrinA4 soluble al endotelio a través de EphA2 promueve la TEM y la viabilidad en los casos de LApos, sugiriendo que la acumulación de esta isoforma en el suero contribuye a la diseminación y supervivencia de las células LLC en procesos in vivo. Los ensayos en ratones mostraron que ephrinA4 soluble aislada del suero de pacientes LApos inducía un incremento en la viabilidad y en el número de células LLC obtenidas de los ganglios. Además ephrinA4 soluble podría promover una ruta transcelular (TC) de TEM en las células LLC, de esta manera, EphA2 podría unir físicamente caveolin1. En conjunto estos datos pueden adicionalmente aportar una nueva alternativa respecto a la importancia de la ruta TC respecto a la paracelular de la TEM.

    En los endotelios linfáticos (HDLEC), encontramos una amplia expresión de los miembros de la familia Eph ephrin, destacando la alta expresión de EphA2 y EphB4. Ensayos TEM en respuesta a CXCL12 sugieren que la señal reverse a través de ephrinA4 y B2 interfieren con la vía de señalización a través de CXCR4 proporcionando señales de supervivencia en los casos LApos.

    En los estudios de salida (TEM dirección apical basal) a través de HUVEC y HDLEC tratadas con TNF en respuesta a S1P, observamos un posible mecanismo de supervivencia de las células LLC. Las interacciones EphA2 con ephrinA4 favorecen la TEM en estas condiciones y por primera vez mostramos que la interacción ephrinB2 con EphB4 esta implicada en la TEM de células LLC. Por lo tanto ephrinB2 podría abrir una nueva vía de estudio en esta señalización como diana terapéutica para evitar la acumulación de estas células en los GL.

  • English

    Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a chronic lymphoproliferative syndrome (SLPC) of CD5+ B lymphocytes. It commonly affects elderly persons with an average of diagnosis ranging from 67 to 72 years and is more common in men than in women (1.7: 1) although the proportion of young patients seems to be increasing [1] The CLL has a very heterogeneous clinical course, from individuals who live with the disease for years without requiring treatment to others with a more aggressive clinical course requiring early treatment. Disease stage is mainly based on clinic and pathological characteristics as defined previously by Rai et al. (year) [2] and Binet et al. (year) . Currently other prognostic factors are used to define the risk of the disease including cellular markers such as CD38 [4] and ZAP70 [5, 6] expression, and genetic variants of the immunoglobulin heavy chain (IgHV) [4, 7] and common cytogenetic aberrations such as deletions in some chromosome regions (d13q, d11q and d7p) or trisomy 12 (Tri12) [8]. Compelling evidence supports that CLL cells survival within the tumor microenvironment is highly dependent on extrinsic signals provided by non-leukemic cell types [9, 10]. In vitro studies support that endothelial cells could protect CLL cells in vivo either through soluble factors and/or direct physical contacts [9-15]. Consequently, endothelial cells could play a similar role during extravasation a fact that, to our knowledge, has not been previously addressed in this disease. Indeed, it has been suggested that transendothelial migration (TEM) could improve survival of non-leukemia cell types including granulocytes [16], T lymphocytes [17] or CD34+CD14+ monocyte precursors [18] indicating that the extravasation through inflamed vascular vessels or the specialized high endothelial venules (HEV) in lymphoid tissues [19] could affect the survival outcome of CLL cells...