Desarrollo de una sonda molecular para inmunoPET dirigida a a metaloproteasa MT1-MMP con aplicación en oncología

• Autores: Angel García de Lucas
• Directores de la Tesis: Miguel Ángel Morcillo Alonso (dir. tes.), Marta Oteo Vives (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2018
• Idioma: español
• Número de páginas: 141
• Tribunal Calificador de la Tesis: Francisca Mulero Aniorte (presid.), Jorge Luis Martínez Torrecuadrada (secret.), Mario Cañadas Castro (voc.), Eduardo Severino Romero Sanz (voc.), Pedro Manuel Uriarte González (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biociencias Moleculares por la Universidad Autónoma de Madrid
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • La inmuno-tomografía por emisión de positrones (inmunoPET) es una técnica de imagen no invasiva basada en la monitorización y cuantificación in vivo de anticuerpos monoclonales (mAb), fragmentos y péptidos de anticuerpos radiomarcados. La imagen de anticuerpos puede proporcionar un método sensible y no invasivo para la caracterización in vivo del fenotipo de la superficie celular, que a su vez podría ayudar a guiar el diagnostico, pronostico, selección de la terapia y monitorización del tratamiento del cáncer. Un gran número de estudios han demostrado la utilidad de la metaloproteasa de matriz de membrana MT1-MMP como una interesante diana para el diagnóstico a causa de su alta expresión en muchos tumores al igual que su importancia en invasión, angiogénesis y metástasis.

    Un anticuerpo monoclonal murino dirigido contra el dominio catalítico de MT1-MMP, denominado LEM 2/15, se conjugó con p-isotiocinatobencil- deferoxamina (DFO-Bz-NCS) para marcarlo con 89Zr. Estudios de biodistribución ex vivo e imagen PET se realizaron en ratones xenograft portadores de células de glioblastoma (GBM) humanas y células de adenocarcinoma ductal de páncreas (PDAC) humanas implantadas en los flancos, ambos tumores con uno de los peores pronósticos y tasas de supervivencia en pacientes. El radiotrazador 89Zr-DFO-LEM 2/15 también se inyectó en modelos ortotópicos de GBM en cerebro con diferentes grados de disrupción en la barrera hematoencefálica y en modelos ortotópicos de PDAC derivados de pacientes (PDX), modelos más reales, con el fin de realizar estudios de imagen PET.

    El rendimiento radioquímico, actividad específica y estabilidad del radiotrazador 89Zr-DFO-LEM 2/15 fue óptimo para la realización de los estudios de imunoPET; además, la conjugación y marcaje del anticuerpo no modificó sustancialmente la inmunoreactividad del anticuerpo intacto. Los experimentos de biodistribución ex vivo y los estudios de imagen molecular mediante PET indicaron que 89Zr-DFO-LEM 2/15 tiene un excelente potencial como radiotrazador para la detección de MT1-MMP en tumores de GBM que sobreexpresan dicha metaloproteasa. Los resultados obtenidos en los modelos ortotópicos de GBM revelaron que el radiotrazador pudo acceder a la masa tumoral cuando la barrera hematoencefálica estuvo alterada. Los estudios realizados con un anticuerpo del mismo isotipo pero inespecífico (89Zr-DFO-IgG) en los modelos de GBM sugieren que una gran parte de la captación del radiotrazador en el tumor fue debida al efecto de permeabilidad y retención aumentada (efecto EPR) característico de los tumores. Los modelos PDX de PDAC mostraron una gran acumulación en la zona del páncreas y la biodistribución ex vivo arrojó resultados similares a al modelo GBM. El análisis inmunohistoquímico confirmo la especificidad del inmunoconjugado en todos los modelos animales. Finalmente, la inmunoPET demostró que es una técnica adecuada para realizar estudios farmacocinéticos