Contribución al estudio de las alteraciones del bisfenol a sobre el tendón y los efectos de recuperación mediante la aplicación de plaquetas (prp) y monocitos medulares
- Autores: Cristina Bellino
- Directores de la Tesis: Rosario Moyano Salvago (dir. tes.), Ana Maria Molina Lopez (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2018
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José María Vázquez Autón (presid.), Francisco Gil Cano (secret.), José García Monterde (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biociencias y Ciencias Agroalimentarias por la Universidad de Córdoba
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: Helvia
- Resumen
RESUMEN DE LA TESIS DOCTORAL DE D./Dª CRISTINA BELLIDO MOYANO El resumen de la tesis para la base de datos Teseo debe ser una presentación de la tesis y tener la extensión suficiente para que quede explicado el argumento de la tesis doctoral. El formato debe facilitar la lectura y comprensión del texto a los usuarios que accedan a Teseo, debiendo diferenciarse las siguientes partes de la tesis:
1. introducción o motivación de la tesis El Bisfenol A (BPA) es un compuesto, con actividad como disruptor endocrino, que es utilizado habitualmente como componente de plásticos y envases de alimentos. Cambios en el pH, abrasiones mecánicas y el calor pueden acelerar la hidrólisis del enlace éster que une las moléculas de BPA en el policarbonato plástico, pudiendo producir que se libere fácilmente llegando al alimento y/o ambiente. (Vandenberg et al., 2007; Mileva et al., 2014). La actividad del BPA como disruptor neuroendocrino ha sido muy estudiada por diversos grupos de investigación en distintas especies (Mandich et al., 2007; Rodríguez et al., 2010; López-Casas et al., 2012; Molina et al., 2013; Lora et al., 2016), siendo fundamentalmente su interferencia en la reproducción la más ampliamente evaluada. Además de su acción deletérea a nivel gonadal se ha observado que puede tener, entre otros efectos, acción sobre la diabetes tipo 2, obesidad, función hepática, alteraciones cardiovasculares, estrés oxidativo e inflamación e incluso a nivel del sistema músculotendinoso (Vandenberg et al., 2013; Rochester, 2013; Giménez et al., 2016) En los últimos años han sido numerosos los trabajos que han estudiado la recuperación de los tendones por traumatismo y cortes en tratamientos con factores de crecimiento, en cambio, apenas se han evaluado tratamientos paliativos de degeneraciones tendinosas con factores de crecimiento, tal y como existen en músculos (Cunha et al., 2014; Giménez et al., 2016). Cuando se producen procesos degenerativos en los tendones, suelen ir acompañados con fenómenos inflamatorios, por lo que pueden convivir conjuntamente las fibras de colágeno tipo I, propia de los tendones, y las fibras de colágeno tipo III que se produce en las inflamaciones. Esta mezcla resulta nociva ya que el colágeno tipo I se distribuye de forma longitudinal al eje de contracción y con unas ondulaciones que favorecen al estiramiento, en tanto que el colágeno tipo III tiene una disposición irregular en todos los sentidos del espacio.
La importancia del BPA como contaminante ambiental y el riesgo que conlleva debido a su baja tasa de biodegradación y su bioacumulación en la cadena trófica han llevado al Parlamento Europeo a incluirla como una sustancia cuya toxicidad debe evaluarse.
Debido al riesgo de exposición a través de la dieta, nos planteamos como objetivo del estudio evaluar los posibles efectos del BPA en el tendón de Aquiles utilizando la histopatología como una herramienta fundamental para investigarlo, además de estudiar su capacidad de recuperación después de la retirada de la exposición a este compuesto; La respuesta muscular también se investigó después de la aplicación de PRP a animales previamente expuestos a BPA.
2.contenido de la investigación Con esta investigación nos propusimos como objetivo evaluar los efectos a nivel tendinoso del bisfenol A, su posible reversión tras la retirada de la exposición, y su recuperación tras la aplicación de plasma enriquecido con plaquetas.
Para ello, Se utilizaron 16 cerdos “Minipig” de 2 meses de edad. El procedimiento experimental se realizó en el Servicio de Animales de Experimentación de la Universidad de Córdoba (SAEX), todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité de Bioética de la Universidad de Córdoba y se realizaron cumpliendo en todo momento las directrices del Real Decreto 53/2013 de 1 de febrero sobre protección de los animales utilizados para experimentación y otros fines científicos, así como la Directiva 2010/63/UE del Parlamento Europeo y del Consejo, de 22 de septiembre de 2010, relativa a la protección de los animales utilizados para fines científicos.
Los Minipig se distribuyeron al azar a uno de los cuatro grupos experimentales: Grupo control (GC), (n=4), el grupo tratado con BPA (n=4) oralmente con 1 mg/kg/day (Sigma Aldrich®, St. Luis, EE.UU.) durante cuatro meses, un tercer grupo BPA-retirada (n=4) a los que tras dos meses de tratamiento se le retiró el BPA durante otros dos meses hasta la biopsia. Y un cuarto grupo tratados con plasma enriquecido de plaquetas (PRP) (n=4), a los animales de este último grupo se les trató con BPA durante 2 meses, después se le retiró y comenzó el tratamiento con PRP. Se les inyectó en el tendón de Aquiles mediante una aguja de biopsia percutánea, una dosis semanal de plaquetas, durante tres semanas. Al acabar los distintos periodos de exposición, tratamiento y/o retirada según el grupo de estudio, se recogieron muestras mediante biopsia del tendón de Aquiles, para su posterior estudio.
Se utilizó la histología como herramienta fundamental en la evaluación del tendón tras la exposición al bisphenol A (Inmunohistoquímica para tinción del colágeno; estudio estructural y ultraestructural; morfometría para cuantificar cológeno) En el lote tratado con BPA los tendocitos se dispusieron en hileras paralelas entre sí, y entre ellas se presentó una neovascularización que las separaban. Estas células fueron alargadas, basofilas de núcleos alargados y bordes citoplasmático poco nítidos. Al M.E. los tendocitos presentaron una morfología de células fibroblastica, con núcleo alargado con cromatina densa, y el citoplasma tenía escasos organoides citoplasmáticos, como correspondían a células fibroblasticas maduras. Aparecieron escasos ribosomas, retículo rugoso y complejo de Golgi. En las células inflamatorias destacó las células fibroblasticas, que se encontraron en el seno del tendón y próximo a los lechos vasculares, tenían una morfología irregular y lo que lo definió fue un amplio retículo rugoso de cisternas irregulares, dispuestas por toda la superficie celular, por lo que las fibras neoformadas se podían liberar en todos los sentidos. Se encontraron algunas células inflamatorias como macrófagos, linfocitos y glóbulos rojos. De los aspectos que destacaron fue un aumento de su vascularización, existiendo en el seno del tendón neovasos que fueron desde metaarteriolas, vénulas y sobre todo abundantes capilares, que solían estar hiperémicas.
En relación de las fibras de colágeno, aparecieron alteraciones, destacándose en primer lugar con la técnica inmunocitoquimica que estas fibras eran del tipo III, colágeno cicatricial. Y por otro lado perdió en parte su distribución en fascículos paralelos, siguiendo recorridos irregulares, perdiendo parcialmente su relación de los tendocitos. De forma difusa o en pequeños depósitos, las fibras de colágeno, en su constitución y al M.E., mostraron engrosamientos, manteniéndose sus estrías, que se correspondían con microqueloides.
Nuestros resultados mostraron como tras la retirada del BPA existió una recuperación de las lesiones originadas disminuyendo las fibras de colágeno de tipo III así cómo los procesos de vascularización tendinosa, y que en el grupo al que se les aplicó PRP apareció una recuperación casi total de las lesiones ocasionadas, dando negativo la inmunocitoquímica a las fibras de colágeno tipo III.
En el lote tratado con PRP y en relación de las fibras de colágeno, aparecieron alteraciones, destacándose en primer lugar con la técnica inmunocitoquimica que estas fibras eran del tipo III, colágeno cicatricial. Y por otro lado perdió en parte su distribución en fascículos paralelos, siguiendo recorridos irregulares, perdiendo parcialmente su relación de los tendocitos. De forma difusa o en pequeños depósitos, las fibras de colágeno, en su constitución y al M.E., mostraron engrosamientos, manteniéndose sus estrías, que se correspondían con microqueloides.
Por los resultados obtenidos, hemos comprobado que los efectos producidos por la acción del bisfenol son reversibles, por lo que al dejar de estar expuestos al BPA se detuvo la acción degenerativa, pero debido al tipo de tejido conectivo fibroso formado en los tendones, la recuperación total de los mismos fue incompleta, sobre todo por mantenerse los puntos de adherencia del tendón a la vaina, que produjo una zona de anclaje que les disminuyó el movimiento de deslizamiento, y también porque el colágeno tipo III formado por la cicatrización, carecía de la capacidad de organizarse en gruesos fascículos longitudinales, y se solía disponer como zonas fibrosas en el seno del tendón, con lo que perdería su capacidad de tracción.
3.conclusión Nuestros resultados nos indican que los tendones se afectan tras la exposición al BPA, generándose procesos inflamatorios apareciendo neovascularización y fibras de colágeno tipo III, estas lesiones hemos observado que pueden ser reversibles, ya que al retirarse la exposición al BPA aparecen fenómenos de recuperación disminuyendo los fenómenos inflamatorios, aunque quedan restos de fibrosis y adherencias; en cambio, tras la aplicación del PRP se produce una recuperación del tendón formando fibras tipo I y tendoncitoblastos, desapareciendo cualquier signo inflamatorio. Por lo tanto, podemos indicar la idoneidad del uso de los factores de crecimiento en el tratamiento de lesiones tendinosas generadas tras la exposición exógena a sustancias estrogenizantes.
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