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Taxonomía, filogenia y papel vectorial de especies del orden siphonaptera

  • Autores: Antonio Zurita Carrasco
  • Directores de la Tesis: Manuel de Rojas Alvarez (dir. tes.), Cristina Cutillas Barrios (dir. tes.), Rocío Callejón Fernández (dir. tes.)
  • Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 2018
  • Idioma: español
  • Número de páginas: 349
  • Tribunal Calificador de la Tesis: José Manuel Úbeda Ontiveros (presid.), Cristina Sánchez-Porro Álvarez (secret.), Victoriano Corpas López (voc.), Carlos Feliu José (voc.), Joaquina Martín Sánchez (voc.)
  • Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biología Molecular, Biomedicina e Investigación Clínica por la Universidad de Sevilla
  • Materias:
  • Enlaces
    • Tesis en acceso abierto en: Idus
  • Resumen
    • OBJETIVOS El principal objetivo de la presente Tesis Doctoral ha sido llevar a cabo un estudio taxonómico, clásico y molecular, y un estudio filogenético de las especies del Orden Siphonaptera parásitas de distintos hospedadores de varias zonas geográficas. Los resultados obtenidos aportarán nuevos criterios de clasificación de este grupo de parásitos, así como determinarán nuevos métodos de control y lucha en el futuro próximo. Además se aportan numerosos datos epidemiológicos referidos a la prevalencia de ciertos patógenos en las poblaciones de pulgas estudiadas.

      DESARROLLO TEÓRICO El desarrollo de la Tesis se ha llevado a cabo en varias etapas:

      1. Recogida de muestras: Para ello se recogieron muestras de distintos hospedadores: perros, erizos, humanos, roedores, etc. de distintas zonas geográficas.

      2. Estudio morfológico clásico: Para llevar a cabo la determinación taxonómica por procedimientos clásicos, se realizó un estudio morfo-biométrico inicial basándonos en los parámetros más característicos citados por los distintos autores.

      3. Estudio molecular y filogenético: El estudio molecular de las distintas especies del Orden Siphonaptera se realizó en varias etapas: extracción de ADN; amplificación mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR); purificación y posterior cuantificación del ADN y secuenciación. Todo ello con el fin de estudiar diferentes marcadores moleculares tanto ribosómicos como mitocondriales de las distintas especies objeto de estudio. Una vez obtenidas las secuencias se alinearon y se analizaron filogeneticamente basándonos en tres parámetros fundamentales: - La variabilidad intraespecífica de las secuencias - La variabilidad interespecifíca - La variabilidad intraindividual 4. Análisis mediante la técnica MALDI-TOF MS de un gran número de muestras pertenecientes a distintas especies del Orden Siphonaptera procedentes de distintos hospedadores y zonas geográficas de Europa. Los resultados obtenidos nos permitieron ampliar una base de datos ya existente con los espectros de referencia para cada una de las especies estudiadas, con el fin de identificarlas y clasificarlas.

      5. Detección molecular y proteómica de especies bacterianas de gran importancia clínica (Wolbachia sp., Bartonella sp., Rickettsia sp., Coxiella sp., Mycobacterium sp. y Borrelia sp.). La metodología empleada fué la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la PCR cuantitativa o en tiempo real (qPCR) y por último la comparación de los espectros obtenidos mediante la técnica MALDI-TOF MS entre muestras infectadas y no infectadas por los patógenos mencionados anteriormente.

      CONCLUSIONES GENERALES 1. Los análisis morfobiométricos y moleculares llevados a cabo en distintas especies del Orden Siphonaptera nos permiten concluir que las técnicas moleculares son una herramienta útil para los estudios taxonómicos y filogenéticos de estas especies.

      2. Tras la amplificación y secuenciación del gen ribosómico 18S del ADNr en sifonápteros podemos concluir que no es una herramienta útil para discriminar a nivel de género, especie y subespecie, mientras que los marcadores ribosómicos ITS1 e ITS2, así como, los genes parciales cox1 y cytb del ADNmt son marcadores útiles para caracterizar y discriminar a esos niveles taxonómicos.

      3. Los espectros obtenidos mediante la técnica MALDI-TOF MS para las especies C. felis, N. fasciatus, P. irritans y S. tripectinata, nos permite concluir la utilidad de esta técnica para la diferenciación específica de pulgas conservadas en alcohol. Asimismo, esta técnica ha mostrado su utilidad en la detección de Bartonella sp. en pulgas.

      4. La detección de patógenos en sifonápteros mediante la técnica cuantitativa qPCR ha mostrado ser la técnica de elección en el diagnóstico de los mismos.

      5. La reducción o aumento en la diversidad del ADN mitocondrial presente en sifonápteros, requiere el estudio de la presencia de endosimbiontes como W. pipientis.


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