Resumen de Microinyeccion y maduracion in vitro de espermatidas
Introducción: La microinyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) cambió radicalmente el tratamiento de la infertilidad de causa masculina (Palermo et al., 1992).
La microinyección, aplicada primeramente a los casos de pacientes con anomalías parciales del espermiograma, evolucionó para aplicarse también en el tratamiento, y con éxito, a los casos de azoospermia obstructiva y de azoospermia secretora En los casos de azoospermia secretora, inclusive, se consiguieron entonces las primeras gestaciones a término recurriendo a espermátidas redondas (ROSI), espermátidas elongándose (ENSI) y a espermátidas elongadas terminales (ELSI).
A partir de ese momento, los trabajos publicados en azoospermia secretora sólo describían los resultados clínicos asociados con microinyección de espermatozoides (ICSI), sin especificar resultados por tipo especifico de histopatología testicular.
No había subgrupos histopato lógicos testiculares, que permitiesen establecer un pronóstico real para los pacientes en cuanto a la recogida de espermátidas y espermatozoides durante la biopsia testicular de tratamiento.
Y por otro lado los trabajos publicados en cuanto a la utilización de espermátidas describían resultados contradictorios.
Con esta situación nos planteamos los siguientes objetivos: 1. Proceder metódicamente al estudio de los pacientes con azoospermia secretora, relacionando los parámetros clínicos con los hallados en la biopsia testicular de tratamiento.
Y la necesidad de los otros dos objetivos.
2. Establecer un medio de cultivo capaz de sustentar la maduración in vitro de espermátidas redondas, en aquellos pacientes en los que no encontrásemos otra célula más madura.
3. Determinar los factores condicionantes de la espermiogénesis humana, utilizando el cultivo y la maduración in vitro de las espermátidas redondas a espermatozoides.
Para ello reunimos durante cuatro años consecutivos la mayor serie clínica mundial del estudio y tratamiento de pacientes con azoospermia secretora (148 pacientes).
Para el segundo objetivo se aislaron por micromanipulación las espermátidas redondas de pacientes con azoospermia secretora y obstructiva, para evitar cualquier contaminación por un foco escondido de espermátidas o espermatozoides, y se cultivaron en medios complejos.
Para aumentar la eficiencia del potencial de diferenciación in vitro de las espermátidas redondas se suplemento el medio de cultivo con rFSH y testosterona hidrosoluble, además de células de Sertoli y células germinales diploides.
Se confirmó la pureza de las poblaciones celulares por FISH y por expresión del mRNA por RT-PCR .
Conclusiones: Se ha determinando un pronóstico correcto para los pacientes con azoospermia no obstructiva teniendo en cuenta la probabilidad, antes del tratamiento, de una extracción testicular de espermatozoides (TESE) exitosa.
a) Se ha establecido una nueva clasificación de los síndromes más acorde con la realidad clínica.
b) Se ha determinado, con la mayor serie clínica publicada, que ROSI no es de aplicación rutinaria.
c) Se ha establecido la inyección de espermátidas elongándose (ENSI). El primer bebé nació en 1999.
Se ha conseguido la espermiogénesis in vitro (Sal Sd: 13%). Los primeros niños nacieron en 2000.
a) Se ha conseguido in vitro la meiosis de (ST1 ST2 Sal: 7%), que puede ser aplicado clínicamente.
b) El potencial de desarrollo de las espermátidas elongándose y elongadas morfológicamente normales maduradas in vitro es casi normal.
Se han determinado los factores limitantes de la espermiogénesis Los futuros proyectos están dirigidos a la purificación de las poblaciones de las células germinales diploides (DGC) para el estudio de las características moleculares de las células estaminales adultas del tejido testicular (hTASC).
