Identificación proteómica de péptidos bacterianos en el líquido ascítico de pacientes con cirrosis y ascitis con cultivo negativo

• Autores: Rocío Caño Alameda
• Directores de la Tesis: José Francisco Such Ronda (dir. tes.), Rubén José Francés Guarinos (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Miguel Hernández de Elche ( España ) en 2009
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Miguel Pérez-Mateo Regadera (presid.), Pedro Zapater Hernández (secret.), Germán Soriano Pastor (voc.), Carlos Guarner (voc.), Ricardo Solà Lamoglia (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
      • Péptidos
      • Proteínas
• Texto completo no disponible (Saber más ...)
• Resumen

  • La traslocación bacteriana (TB) es el mecanismo propuesto para explicar el paso de bacterias a través de la barrera intestinal en los pacientes con cirrosis y ascitis, y está relacionada con una marcada actividad proinflamatoria que empeora el pronóstico de estos pacientes. Sin embargo, la intensidad de la respuesta inmunológica frente a microorganismos viables o sus productos puede ser diferente. La viabilidad bacteriana en el líquido ascítico (LA) de pacientes con cirrosis y ascitis implica la presencia de proteínas de síntesis bacteriana en este medio biológico. El objetivo principal es, por tanto, la identificación de signos de viabilidad bacteriana mediante detección de péptidos bacterianos en el LA de pacientes con cirrosis y ascitis con cultivo negativo y correlacionar su presencia con la respuesta inflamatoria en estos pacientes. Para ello, se analizó el contenido proteico del LA de pacientes con cirrosis descompensada (n=47) y de cepas bacterianas tipo frecuentes en estos pacientes, mediante electroforesis bidimensional en geles de poliacrilamida. Los mapas proteicos bidimensionales se compararon digitalmente utilizando PDQuest Advanced (Biorad) y la identificación de péptidos bacterianos como posibles marcadores complementarios de traslocación se realizó por espectrometría de masas (MALDI-TOF MS). Se valoró la respuesta inflamatoria asociada a través de la determinación por ELISA de los niveles de TNF-¿, IFN-¿, IL-12 y óxido nítrico (NOx) en muestras de LA de todos los pacientes. Los pacientes fueron distribuidos de acuerdo a la presencia (ADNbact+, n=16) o ausencia (ADNbact-, n=31) de ADN bacteriano simultáneamente en sangre y LA. De los 16 pacientes (ADNbact+), 8 (50%) presentaron evidencias de viabilidad bacteriana al mostrar péptidos bacterianos en el contenido proteico del LA. Los niveles de citocinas y NOx se mostraron significativamente más altos en pacientes con péptidos bacterianos que en aquellos sin presencia de péptidos. Por lo tanto, este trabajo demuestra la viabilidad bacteriana en un subgrupo de pacientes con cirrosis y ascitis, a través de la identificación de péptidos bacterianos y que su presencia se asocia a un incremento en los niveles de mediadores proinflamatorios.