Resumen de Análisis de la ruta p53-Mdm2-p14ARF en neuroblastoma y su relación con la quimioterapia
El neuroblastoma es el tumor maligno sólido extracraneal más frecuente durante la infancia. Inicialmente, la mayoría de los neuroblastomas responden a la terapia citotóxica y la radioterapia regional. Sin embargo, varios casos presentan recidivas con diferentes niveles de resistencia a quimioterápicos. Se ha sugerido que las alteraciones en la ruta de regulación p53/Mdm2/p14ARF están relacionadas con la quimiorresistencia. Por ello, en este trabajo se analiza la posible presencia de alteraciones en esta vía de señalización en neuroblastoma y su relación con la resistencia a fármacos antineoplásicos conocidos y /o agentes de diferenciación.
Con este fin se ha analizado la secuencia de los axones 5 al 9 del gen TP53 en 12 líneas celulares de tumores neuroblásticos. El análisis ha revelado la presencia de una mutación no conservativa en la línea celular de neuroblastoma SK-N.FI: 135 G¿T (Cys¿Fhe). Sin embargo no se han detectado mutaciones en dicha región en ninguna de las 38 muestras de tumores neuroblásticos analizadas. El estudio mediante FISH del estado de MDEM2 mostró un patrón de hibridación normal en las líneas celulares SH-SY5Y, SK-N-SH, IMR-32, SK-N-Be(2), SK-N-FI, Kelly y SK-N-MC, un cariotipo poliploide en BE (2)C, SK-N-DZ, SIMA y MHH-NB-11 y pérdida del gen en MC-IXC. El estudio de MYCN mostró a su vez un patrón de hibridación normal en las líneas celulares SK-N-MC y MC-IXC, un patrón compatible con ganancia en SH-SY5Y y SK-N-SH y amplificación en las restantes líneas celulares (BE(2)C, IMR-32, SK-N-Be(2), SK-N-FI, Kelly, SK-N-DZ, DIMA y MHH-NB-11). El análisis de p14ARF no ha permitido detectar deleciones homocigóticas de este gen en ninguna de las 12 líneas celulares analizadas. Además, por MSP y MCA-Meth se ha comprobado que su promotor se encuentra libre de metilación en todos los casos A pesar de ello, aunque por PCR semicuantitativa se observo la presencia de mRNA de p14ARF en las 12 líneas celulares, no se pudo detectar la presencia de la proteína por Western blot en ninguna de ellas.
A diferencia de lo observado con los isómeros 9-cis y todo-trans del ácido retinoico, el tratamiento de las líneas celulares SK-N-FI y SK-N-Be(2) con doxorubicina, etopósido, displatino o melfalán disminuyó la viabilidad celular en los cultivos sin que se observaran diferencias en las respuesta de las células a los diferentes compuestos, excepto en el caso del cisplatino, con el que la línea SK-N-Be(2) resultó más sensible. El tratamiento de ambas líneas celulares con los quimioterápicos dio lugar a un incremento del porcentaje de células apoptóticas, que se manifestó a partir de las 72 horas con aumentos de entre 2 y 6 veces en el caso de las células SK-N-FI y de entre 2 y 10 veces en el de SK-N-Be(2). Ambos isómeros del ácido retinoico indujeron apoptosis en los cultivos de células SK-N-FI, que tienen p53 mutada, pero no en los de células SK-N-Be(2). La doxorubicina, el etopósido, el cisplatino y el melfalán afectaron a la distribución del ciclo celular en las dos líneas celulares provocando un bloqueo del ciclo en fase G2/M. El tratamiento con 9-cis RA aumentó los niveles de p53 en ambas líneas celulares, mientras que el cisplatino, el melfalán y el todo-trans RA disminuyeron su expresión en células SK-N-FI. El tratamiento con cisplatino también redujo los niveles de Bcl-2 en células SK-N-FI. Sin embargo, ninguno de los compuestos empleados modificó la expresión de p21 en ninguna de las dos líneas celulares.
