Resumen de Plasmodium falciparum acil-coa sintetasas (pfacs1 y pfacs3) e interacción con el eritrocito hospedador
Se identificó en nuestro laboratorio la primera Acil-Coenzima A Sintetasa de ácidos grasos de cadena larga (Matesanz y col., 1999) de Plasmodium falciparum, PfACS1, que parecía pertenecer a una familia de proteínas homólogas en el parásito. Nos planteamos por lo tanto identificar en el genoma de Plasmodium todos los miembros de esta familia de proteínas y estudiar su expresión e interacciones con el hospedador en las etapas intra-eritrocíticas del ciclo de vida del parásito.
Identificamos 10 nuevos miembros de la familia de las PfACSs y estudiamos comparativamente las secuencias de cada una de ellas. Obtuvimos anticuerpos específicos capaces de reconocer diferencialmente a distintos miembros de la familia, los cuales utilizamos para la inmunolocalización celular en las etapas sanguíneas del ciclo de vida del parásito, P.falciparum cepa 3D7. Vimos que estas proteínas se presentaban expresión diferencial estadio-específica.
Centramos el estudio de las características de estas proteínas en PfACS1 y PfACS3, idénticas en su extremo C-terminal (CTD 1.1) reconocido por el anticuerpo monoclonal específico que denominamos 5D9, y que se expresan diferencialmente en las etapas del ciclo intra-eritrocítico.
Según reveló la inmunofluorescencia con 5D9, PfACS1 y PfACS3 pareceían ser secretadas fuera del parásito al citoplasma del eritrocito infectado, lo cual corroboramos por extracción con saponina.
Vimos que esa secreción era inhibida por el tratamiento con brefeldina A (BFA), indicando la implicación de una ruta clásica de transporte a través de retículo endoplásmico-Golgi. El BFA afecta además al desarrollo de los parásitos inhibiendo la expresión de proteínas estadio-específicas correspondientes a etapas maduras del desarrollo como es el caso de PfACS1, manteniendo la expresión de proteínas marcadoras de etapas tempranas.
PfACS1 y PfACS3 resultaron insolubles a la extracción con diferentes detergen
