Tolerancia a p-hidroxibenzoato de la cepa pseudomonas putida dot-t1e: implicación del sistema de transporte de hierro exbbdtonb

• Autores: Patricia Godoy
• Directores de la Tesis: Juan Luis Ramos (dir. tes.), Maria Isabel Ramos-Gonzalez (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Granada ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Ricardo Amils Pibernat (presid.), Emilia Quesada Arroquia (secret.), Ana Segura Carnicero (voc.), Ramon Rosselló Mora (voc.), José Ignacio Badiola Saíz (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Microbiología
    • Biología molecular
• Texto completo no disponible (Saber más ...)
• Resumen

  • Pseudomonas putida DOT-T1E es una cepa altamente tolerante a disolventes orgánicos como el tolueno, una característica que la hace sumamente atractiva en el campo de las biotransformaciones en sistemas de dobel fase. Un ejemplo concreto lo constituye la síntesis de p-hidroxibenzoato (PHBA), un compuesto de alto valor añadido en la industria, a partir de tolueno. Puesto que la tolerancia de DOT-T1E a PHBA y otros compuestos hidroxilados estaba inexplorada, en este trabajo se emprendió la caracterización fisiológica de la tolerancia de DOT-T1E a estos compuestos y la elucidación de las bases moleculares implicadas en la misma. Con el objetivo de encontrar aquellos genes que estuviesen implicados en la tolerancia y/o sensibilidad a este aromático, se generaron mutantes de DOT-T1E con el transposón mini-Tn5'phoAKm para así seleccionar aquellos clones que presentaran un incremento en la tolerancia o por el contrario fueran más sensibles a PHBA. Se aisló un mutante que presentó un notable descenso en la tolerancia a PHBA, denominado PhoA5.

    El análisis de la mutación indicó que el minitransposón se insertó en el gen exbD, perteneciente al sistema exbBDtonB, que está implicado en el transporte de ferrisideróforos y vitamina B12 al interior de las células.

    Asimismo, para desvelar la implicación de cada uno de los componentes del sistema ExbBDTonB en la tolerancia a PHBA, se construyeron mutantes dirigidos en cada uno de los genes del sistema por reemplazamiento génico y se analizó su fenotipo.

    Todos los mutantes, incluido el mutante por transposición PhoA5, necesitaron un suplemento extra de hierro para su crecimiento óptimo, y resultaron más sensibles a PHBA y tolueno que la cepa silvestre. Estos resultados pusieron de manifiesto la importancia del sistema ExbBDTonB en la tolerancia a PHBA y tolueno que presenta la cepa DOT-T1E, probablemente a través de la energetización de las bombas de eflujo.