Stepwise differentiation of pancreatic acinar cells from mES cells by manipulating signalling pathway

• Autores: Fabien Delaspre
• Directores de la Tesis: Anouchka Skoudy (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Pompeu Fabra ( España ) en 2011
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Rosa María Gasa Arnaldich (presid.), Eugenia Mato Matute (secret.), Pierre-Étienne Bouillot (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
    • Biología humana
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en:  TDX  e-Repositori UPF 
• Resumen

  • Aunque se conoce la implicación de las células pancreáticas acinares en patologías exocrinas (pancreatitis y cáncer de páncreas), la falta de modelos normales basados en células ha limitado el estudio de las alteraciones que suceden en el programa de diferenciación pancreática. Hemos demostrado previamente que las células madre embrionarias murinas, que son pluripotentes, pueden adquirir un fenotipo acinar in vitro. Esto se consiguió, en parte, con una combinación de señales que procedían del cultivo de páncreas fetales que, pero, no era específico del linaje pancreático. El objetivo de este trabajo fue el de desarrollar un protocolo selectivo para el linaje acinar basado en la activación secuencial de vías de señalización que recapitulen el desarrollo pancreático in vivo, a través de la formación definitiva del endodermo, la especificación pancreática y acinar y la expansión/diferenciación de progenitores acinares. El tratamiento de cuerpos embrionarios con Activina A promovió la expresión de genes de endodermo como está previamente descrito. El tratamiento subsecuente con ácido Retinoico, FGF10 y Ciclopamina, un inhibidor de la vía de Hedgehog, resultó en la inducción de los marcadores de progenitores pancreáticos Pdx1, Ptf1a y Cpa1 pero también de aquellos expresados en el linaje pancreático, que fueron reducidos con la inhibición de BMPs. Las células fueron a continuación cultivadas en Matrigel utilizando un sistema de cultivo en 3D en presencia de folistatina, dexametasona y KGF comportando una inducción significativa de los niveles de mRNA y proteína de marcadores acinares y una disminución de la expresión de los de marcadores acinares. Además, se vio que Amyl se secretaba en el medio. Estos datos indican que la activación selectiva del programa de diferenciación acinar en células madre embrionarias se puede llevar a cabo mediante una inducción escalonada de vías de señalización involucradas en el desarrollo pancreático exocrino proporcionando una herramienta potencial para estudiar la diferenciación pancreática y enfermedades relacionadas con el páncreas.