Estabilidad, plegamiento y asociación del dominio de dimerización de la proteína de la cápsida del virus de la inmunodeficiencia humana

• Autores: Maria del Carmen Lidon Moya
• Directores de la Tesis: José Luis Neira Faleiro (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Miguel Hernández de Elche ( España ) en 2005
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jose Manuel González Ros (presid.), Francisco Javier Gómez Pérez (secret.), Mauricio García Mateu (voc.), Marta Bruix Bayes (voc.), Javier Sancho Sanz (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Bioquímica física
  • Ciencias de la vida
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: RediUMH
• Resumen

  • El objetivo principal del presente trabajo ha sido la determinación y caracterización de un compuesto con la capacidad de heterodimerizar con CA-C (dominio carboxilo terminal de la proteína de la cápsida del VIH-1), e impedir de esta manera el ensamblaje natural de la cápsida, y en consecuencia, la infectividad del virus del sida. Para ello, el trabajo se divide en tres capítulos.

    En el primer capítulo se ha llevado a cabo la caracterización termodinámica de CA-C, mediante la utilización de diversas técnicas biofísicas: fluorescencia, DC, FTIR, RMN, y cromatografía de exclusión por tamaño molecular, a diferentes condiciones de pH y temperatura, con el fin de describir la estabilidad de las formas monomérica y dimérica de CA-C, y caracterizar cualquier posible intermediario que pueda aparecer en la reacción de plegamiento-asociación de la proteína, así como para comprender los factores energéticos que gobiernan la dimerización. Los resultados indican que el equilibrio de desnaturalización térmica de CA-C se compone de tres transiciones térmicas reversibles e independientes: (i) la primera transición (Tm 307 K), que se observa por FTIR y RMN, supone la disociación del dímero de CA-C, dando lugar a un intermediario monomérico plegado; (ii) la segunda transición (Tm 325 K), observada por fluorescencia del ANS, anisotropía y DC en el ultravioleta cercano, implica el desplegamiento parcial del intermediario monomérico plegado; y, (iii) la tercera transición (Tm 332 K), que se observa por DC en el ultravioleta lejano, absorbancia, FTIR y RMN, conlleva el desplegamiento global del intermediario monomérico parcialmente plegado. Además, también se han determinado los parámetros termodinámicos de la disociación y desnaturalización de las formas dimérica y monomérica de CA-C a pH fisiológico. Se ha observado que CA-C, tanto en forma monomérica como dimérica, experimenta una transición conformacional