La cancelación de bloqueos inducidos en el ciclo celular por rutas de chequeo, en plantas

• Autores: Helvia Rosa Pelayo Benavides
• Directores de la Tesis: Consuelo de la Torre García Quintana (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1999
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jorge Fernández López-Sáez (presid.), Patricio Aller Tresguerres (secret.), Ricardo Paniagua Gómez-Álvarez (voc.), Gonzalo Giménez Martín (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
      • Citología
    • Biología vegetal (botánica)
      • Histología vegetal
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • La cancelación de las rutas de chequeo por análogos de purinas y, en particular, la inducción de la entrada indebida en mitosis de células detenidas en la fase S son fenómenos básicamente descritos en células animales transformadas. Las células vegetales comparten con otros organismos eucarióticos tanto la maquinaria del ciclo como varias rutas de chequeo susceptibles de cancelación por análogos de purinas. Con esto en mente, se evaluó la respuesta a hidroxiurea y/o cafeína en dos modelos vegetales con complemento diploide íntegro: los meristemos radicales de AIlium cepa L. y células en cultivo de Nicotiana fabacum L. que eran transgénicas para el gen de la cicliia mitótica de alfalfa. Se determinó el efecto de estas drogas sobre índices mitóticos y crecimiento celular en células sincrónicas marcadas como binucleadas. Al mismo tiempo, se evaluó su efecto sobre las diferentes subperiodos de la interfase en las células nativas, asincrónicas, mediante citometría de flujo. Mediante este técnica se analizó la relación entre contenido de DNA y síntesis de DNA (mediante codetección de incorporación de 5-bromo-Tdesoxiuridina), así como la razón tamaño celular / contenido de DNA. La hidroxiurea provocó la acumulación de las células proliferantes en la fase S como resultado de la activación de su ruta universal de chequeo. Las células, pues, se acumularon inicialmente y de manera transitoria en la porción temprana de la fase S, para después comenzar a avanzar en su replicación hasta bloquearse permanente en el S medio. Estos resultados sugieren la existencia de un ruta de chequeo sensible a la velocidad de replicación que debe controlar al mismo tiempo la activación de diferentes orígenes de replicación durante la fase S. La hidroxiurea también desacopló el ciclo de síntesis de DNA del ciclo de crecimiento celular, mostrando que ambos se dan en paralelo. La cafeína se comportó como un inhibidor de la progresión del ciclo en ambos modelos experimentales, interfiriendo con la transición Gl/S y G2/M, sin interferir con la progresión por la fase S. El tratamiento de la población asincrónica con la combinación hidroxiurea y cafeína previno la acumulación de células en el S temprano, mientras que el mismo tratamiento no modificó el paso del S temprano al S medio en la población sincrónica. Estos resultados indican la acción independiente de ambas drogas, lo que a su vez permite el mapeo de regiones sensibles a las mismas en el ciclo celular. La expresión ectópica de ciclina mitótica acortó la duración de la interfase pero fue incapaz de promover la entrada prematura a mitosis de las células retenidas en fase S por hidroxiurea al añadir cafeína. Esto sugiere que la ciclina mitótica es necesaria, pero no suficiente, para provocar la entrada de estas células en mitosis.