Hormonas tiroideas maternas y desarrollo cortical fetal. Un modelo de hipotiroxinemia temprana en prematuros
- Autores: Daniela Vanesa Navarro
- Directores de la Tesis: Pere Berbel Navarro (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Miguel Hernández de Elche ( España ) en 2012
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Bernal Carrasco (presid.), Clara Carmen Faura Giner (secret.), Federico Soriguer Escofet (voc.), Carlos De Cabo (voc.), Beatriz Morte Molina (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Se ha desarrollado un modelo de privación tardía de HT maternas al feto, en el que los fetos de ratas (Wistar) son transitoriamente privados de las HT materna durante el último período de gestación, un periodo en el cual el desarrollo cerebral es equivalente al de la HTP.
Ratas gestantes se tiroidectomizan quirúrgicamente a E16. Las crías; al nacer, se transfieren a ratas normales y se sacrifican a P40 (grupo LMH16). Así, los fetos sólo han tenido carencia de HT maternas al final del desarrollo intrauterino, siendo el desarrollo postnatal normal. A las ratas tiroidectomizadas se les coloca subcutáneamente, en el dorso, bombas de calcitonina (1µg/100g de peso/día) y PTH (2,5µg/100g de peso/día). Se les suministra un suplemento de pidolato cálcico y vitamina D3 (IBERCAL®-D, 1,6 g /1000ml) en agua bebida desde E16 hasta P0, para controlar la homeostasis del calcio, evitando la hipocalcemia y procurar que la gestación llegue a término normalmente a pesar de la tiroidectomía. Se estudiaron crías de los siguientes cuatro grupos: Controles (C), LMH16 y LMH16 mas infusiones de T4 a E17-P0 (LMH+T417). Todas las ratas fueron inyectadas con BrdU desde E17- P0 [19].
De cada cerebro, se han obtenido secciones coronales (100 µm de grosor) para ser procesadas para Nissl, NeuN y BdrU. Además se ha estudiado la distribución de distintas subpoblaciones de neuronas GABAérgicas usando anticuerpos anti-GAD67, -parvalbumina (PV), -calbindina 28 kD (CB), -calretinina (CR), -NPY y -NOS. Se ha estudiado la laminación cortical y la posible presencia de neuronas ectópicas en la sustancia blanca subcortical. La distribución de zinc vesicular se estudió con el método de TIMM. Dos ratas de cada grupo experimental se han inyectado con selenito de sodio (20 mg/kg). Los cortes se revelaron con nitrato de plata. La muerte neuronal posnatal se estudió con el método de TUNEL [19].
En colaboración con el Dr. J. Bernal del IIB (CSIC-UAM), se analizaron los efectos del hipotiroidismo materno (grupo LMH) y materno-fetal (grupo MMI) en la expresión génica en la corteza cerebral fetal a E21. En el grupo MMI, el descenso de HT maternas y fetales se ha inducido por administración de metimazol al 0.02% y perclorato de potasio al 1% en agua bebida desde E10 hasta el parto [4].Se analizó la expresión génica mediante microarrays en ratas C, MMI y LMH.
Finalmente, en ratas LMH y MMI se estudió a diferentes edades embrionarias y postnatales la expresión de cinasa IV activada por Ca2/calmodulina (Camk4) y Nurr1. De cada cerebro, se han obtenido secciones coronales (100 µm), procesadas mediante hibridación in situ e inmunohistoquímica. Se ha caracterizado la población de células Nurr1+ con doble inmunohistoquímica combinando Nurr1 con NeuN, Gad67, GFAP y CNPasa.
