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Modificación del patrón de expresión genética de células madre mesenquimales de origen de pulpa dental humana mediante medio de diferenciación comercial y medio condicionado

  • Autores: Eva María Notario Martín
  • Directores de la Tesis: Luis Blanco Jérez (dir. tes.), José Antonio Uranga Ocio (dir. tes.), Rafael Baca Pérez Bryan (dir. tes.)
  • Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2016
  • Idioma: español
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  • Resumen
    • El término de célula madre hace referencia a un tipo de célula que es capaz de diferenciarse a distintos tipos de células. Por motivos técnicos no se experimenta con las mejores células madre que hay: las embrionarias; y que dada su pluripotencialidad, podrían dar lugar a cualquier tipo de célula de un organismo.

      Las células madre del adulto son multipotentes, diferenciándose a linajes específicos. Dentro de este grupo, se encuentran las células madre mesenquimales (SCs), que se diferencian a los 3 linajes mesodérmicos: osteoblastos, adipocitos y condrocitos.

      Dentro la odontología, una fuente muy accessible de SCs es la pulpa dental (DPSC). Son de apariencia más fibroblastoide, pueden ser criopreservadas, proliferan extensamente (hasta 25 pases), son poco inmunogénicas, expresan marcadores mesenquimales y tienen mayor plasticidad.

      La caracterización de las DPSC se basa en el uso de métodos como tinciones histoquímicas, citometría de flujo y PCR (reacción en cadena de la polimerasa) para establecer la identidad de células madre y la función.

      Se ha demostrado que las DPSCs pueden diferenciarse a osteoblastos, siendo una fuente de hueso autólogo in vitro. El uso de estas células en medicina regenerativa abre un mundo de posibilidades reduciendo los problemas inmunológicos entre individuos.

      Existen en el mercado medios de cultivo comercializados que favorecen la inducción osteogénica de las DPSC y hemos querido comparar si esta diferenciación es idéntica si se utiliza el medio de cultivo condicionado obtenido de osteoblastos.

      OBJETIVO: determinar que no hay diferencia significativa entre los perfiles de expresión genéticos en las DPSCs cultivadas con medio de inducción osteogénico comercializado (Lonza®) y las DPSCs cultivadas con medio condicionado obtenido de cultivo de osteoblastos.

      MATERIAL y METODOS: Se recolectaron muestras de hueso y pulpa dental de los terceros molares incluídos de donantes voluntarios que asistían al Departamento de Cirugía Bucal de la Facultad de Odontología de la Universidad Complutense de Madrid. Se cultivaron dichas células, se caracerizaron mediante tinciones hitoquímicas y su inmunofenotipo por citometría de flujo y se determinó su perfil de expresión genético mediante PCR tanto de osteoblastos como de células madre. Una vez identificadas, estas células madre se sometieron a protocolos de inducción osteogénica mediante el uso de medio de cultivo de diferenciación osteogénica y medio de cultivo condicionado. Posteriormente se volvió a estudiar el perfil de expresión genética por PCR de las células madre inducidas por los medios para hacer la comparativa con los perfiles primarios.

      RESULTADOS: Las muestras eran positivas para CD44, CD90, CD73, CD29, CD59 y el CD105 y negativas para CD11b, CD14, CD20, CD45, CD80, HLA-DR, CD34, CD 66 a/c/e y CD17. De esta manera se cumplían los criterios de la ITSC (Sociedad Internacional de Terapia Celular) de células madre. El marcador de células hematopoyéticas, CD34, no se detectó.

      Existe diferencia entre los perfiles de expresión genética para los genes COL1A1 y BMP7 y no hay diferencia significativa para la expresión de los genes ALPL, BGLAP, RUNX2, SPP1 y BMP2 en las células madre sometidas a medio de cultivo de inducción osteogénica comercializado y las células madre sometidas al medio condicionado.

      Hubo diferencias de expresión génica de los 7 genes analizados en las MSCs aisladas de diferentes fuentes así como en las sometidas a protocolos de inducción.

      CONCLUSIÓN: Se necesitan más estudios en diferentes momentos de cultivo celular para poder ver si existe diferencia estadísticamente significativa en el perfil genético de las DPSCs sometidas a inducción osteogénica por los dos medios comentados. Los propios factores de crecimiento que segregan las células óseas en cultivo se podrían aplicar en cirugías regenerativas disminuyendo el tiempo de recuperación y minimizando la inflamación.


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