Estudio de anomalías meióticas y aneuploidías en pacientes con azoospermia secretora
- Autores: Vanessa Peinado Cervera
- Directores de la Tesis: Carmen Rubio Lluesa (dir. tes.), Manuel Luis Gil Salom (codir. tes.), José Remohí Giménez (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 2016
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Carlos Simón Vallés (presid.), Lorena Rodrigo Vivó (secret.), Francesca Vidal Domínguez (voc.)
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: RODERIC
- Resumen
La contribución de anomalías meióticas a la infertilidad masculina humana ha sido reconocida desde hace tiempo. Los errores meióticos ligados a los procesos de sinapsis, recombinación y reparación del ADN, interfieren en el proceso normal de la meiosis pudiendo dar lugar a una segregación anómala de los cromosomas homólogos (meiosis I) ó las cromátidas hermanas (meiosis II) y generar espermatozoides portadores de alteraciones cromosómicas numéricas (aneuploides o diploides). El objetivo principal de la presente tesis doctoral fue estudiar las diferencias en el proceso de la meiosis entre varones de fertilidad probada y varones infértiles con azoospermia secretora de origen idiopático, diferenciando dentro de este grupo aquellos que inicialmente fueron criptozoospermicos y evolucionaron a azoospérmicos. Mediante técnicas de inmunocitogenética e hibridación in situ fluorescente se evaluó la progresión meiótica, la frecuencia de recombinación meiótica y la longitud de los complejos sinaptonémicos, en espermatocitos primarios en estadío de paquitene, así como la incidencia de disomías y diploidías en espermatozoides testiculares en ambos grupos. Los varones con azoospermia secretora presentaron una acumulación de espermatocitos primarios en los estadios iniciales de la profase I, con menor porcentaje de meiocitos que superaron el punto de control de paquitene. La frecuencia de recombinación meiótica en los pacientes con azoospermia secretora de origen idiopático mostró una disminución significativa al compararla con el grupo control de pacientes post-vasectomizados. Sin embargo, en el grupo de pacientes criptozoospérmicos esta disminución no mostró diferencias significativas con el grupo control. Se observó una variación de la frecuencia de recombinación entre individuos, tanto en los grupos de estudio, como en el grupo control que no se correlacionó ni con la edad de los pacientes, ni con el tiempo transcurrido desde la vasectomía en el caso de los individuos pertenecientes al grupo control. El estudio de la frecuencia específica de recombinación meiótica por cromosoma mostró en los pacientes con azoospermia secretora una disminución en los niveles de recombinación para la mayoría de cromosomas analizados, independientemente de su tamaño y estructura. La medición de la longitud total de los complejos sinaptonémicos en los espermatocitos primarios en estadio de paquitene resultó similar en el grupo control y en los grupos de estudio, por lo que no se observó una correlación entre longitud de complejos sinaptonémicos con los niveles de recombinación. En pacientes con azoospermia secretora se observó un incremento significativo en la incidencia de disomías y diploidías para todos los cromosomas analizados al compararlo con el grupo control. Los pacientes criptozoospérmicos sólo mostraron este incremento significativo en las disomías para el cromosoma 18, los cromosomas sexuales y para la incidencia de diploidías. El 81,2% de los pacientes del grupo de azoospermia secretora que presentaron unos niveles de recombinación meiótica significativamente inferiores a los del grupo control mostraron un incremento de anomalías cromosómicas en sus espermatozoides. The contribution of meiotic abnormalities in human male infertility has been recognized. Meiotic errors linked to synaptic processes, recombination and repair of DNA interfere with the normal process of meiosis and can produce an abnormal segregation of homologous chromosomes (meiosis I) or sister chromatids (meiosis II),resulting in the generation of sperm with numerical chromosome abnormalities (aneuploid or diploid). The aim of this PhD project was to assess the differences in the process of meiosis between fertile males and idiopathic non-obstructive azoospermic patients.Our control group was formed of 10 obstructive azoospermic vasectomized patients and our study group was formedof 23 non-obstructive azoospermic patients and 5 criptozoospermic patients. We performed inmunocitogenetic assay and fluorescence in situ hybridization (FISH) technique to analyse meiotic progression, sinaptonemal complex total length, recombination frequency in primary spermatocytes at pachytene stage and the incidence of aneuploidy and diploidy in testicular sperm. Non-obstructive azoospermic patients and criptozoospermic patients showed a significantly higher percentage of cells at the earlier stages of meiotic progression compared to the control group, before to complete the synapsis of homologues chromosomes. Suggesting partial meiotic arrest before reaching pachytene stage. Non-obstructive azoospermic patients group showed a significant decrease of recombination levels compared to the control group. However,the criptozoospermic group showed a decrease in recombination levels that was not significant compared to the control group. We observed a variation in the recombination frequency among individuals that was not correlated with the age of the patients and in the case of the control group was not related to the time from vasectomy. The decrease in recombination levels was observedfor the majority of the chromosomes analyzed. Independently of the chromosome size or structure. Regarding the synaptomal complex lenght, no differences were observed among groups, suggesting that there is no correlation between recombination frequency and synaptonemal complex length. FISH analysis in testicular spermatozoa in the non-obstructive azoospermic group showed an increase of aneuploidy and diploidy rate for the chromosomes analyzed compared to the control group. The criptozoospermic group only showed significant increase in the incidence of disomies for chromosome 18, sex chromosomes and diploidy. A significant increase in the incidence of sperm chromosomal abnormalities was detected in the 81.2% of non-obstructive azoospermic patients with significantly decrease of recombination levels compared to the control group.
