Resumen de Desarrollo de metodologías avanzadas basadas en técnicas cromatográficas acopladas a espectrometría de masas para el análisis de mezclas complejas de carbohidratos de interés alimentario.
El objetivo general de esta Tesis Doctoral ha sido el desarrollo de nuevas estrategias analíticas basadas en técnicas cromatográficas acopladas a espectrometría de masas (GC-MS, GC×GC-ToF MS, LC-MS), que supongan ventajas en cuanto a resolución, sensibilidad y selectividad frente a las ya existentes, para el análisis de mezclas complejas de carbohidratos de interés alimentario. Para alcanzar este objetivo, las metodologías de análisis desarrolladas se han basado en (i) la mejora en la separación conseguida mediante el estudio de los cambios en la respuesta cromatográfica con las distintas condiciones experimentales y (ii) la mejora en la identificación proporcionada por el estudio de la respuesta en espectrometría de masas de carbohidratos con distinta estructura.Así, en primer lugar, se ha llevado a cabo una caracterización exhaustiva por GC-MS de la respuesta tanto cromatográfica (índices de retención lineal) como de espectrometría de masas (abundancias relativas de m/z características) de patrones de trisacáridos comerciales y sintetizados en el laboratorio, previamente derivatizados a O-trimetilsilil oximas (TMSO), que ha permitido establecer relaciones entre la estructura del carbohidrato (composición monomérica y enlaces glicosídicos) y sus datos de GC-MS. Como ejemplo de aplicación, los resultados obtenidos se han empleado para la determinación de la composición en tri- y tetrasacáridos de una mezcla compleja como la miel, haciéndose especial hincapié en la caracterización de carbohidratos desconocidos.En relación al desarrollo de metodologías por GC×GC, se ha aplicado por primera vez esta técnica al análisis de carbohidratos, poniéndose a punto un método que ha permitido la separación con éxito y posterior identificación/caracterización de mezclas complejas de disacáridos (previamente convertidos a TMSO derivados) como las presentes en miel. Por otra parte, y con el fin de facilitar la puesta a punto de métodos basados en GC×GC, se ha desarrollado a partir de un limitado número de determinaciones en 1D GC un programa de estimación de la respuesta cromatográfica (tiempo de retención y anchura de pico) en GC×GC para compuestos de distinta naturaleza, que ha sido aplicado a la selección de las condiciones óptimas de separación de disacáridos de la miel. El desarrollo de otro programa de simulación adicional ha puesto de manifiesto las limitaciones en cuanto a la posibilidad de estimación de la retención en GC×GC a partir de datos de referencia (índices de retención en 1D GC publicados), permitiendo, sin embargo, obtener una aproximación de la separación para mezclas complejas.Para el análisis sin derivatización previa de mezclas complejas de oligosacáridos neutros, se han desarrollado, validado y comparado métodos basados en distintos modos de LC (HPAEC, RP, HILIC y GCC), algunos de ellos acoplados a MS. Dichos métodos se han aplicado al análisis de mezclas de oligosacáridos con reconocidas propiedades prebióticas (fructo- y gentio-oligosacáridos) y al de otros cuya actividad no se había probado hasta el momento (gluco-oligosacáridos procedentes de celobiosa y dextransacarasas). Como complemento a este último objetivo parcial, se ha determinado el efecto de dichos oligosacáridos sobre el crecimiento de la microflora intestinal, tratándose de establecer relaciones entre la estructura química y el carácter prebiótico del oligosacárido
