Caracterización de la lacasa de "Streptomyces cyaneus" CECT 3335 y aproximación al estudio de su potencial oxidativo y función biológica
- Autores: Raquel Moya Lobo
- Directores de la Tesis: María Enriqueta Arias Fernández (dir. tes.), Manuel Pascual Hernández Cutuli (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Alcalá ( España ) en 2011
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José Antonio Salas Fernández (presid.), Juana Rodríguez Bullido (secret.), María Isabel Pérez Leblic (voc.), Francisco Ignacio Javier Pastor Blasco (voc.), Ramón Santamaría Sánchez (voc.)
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- Resumen
- español
Las lacasas son metaloproteínas con actividad fenoloxidasa que se incluyen en el grupo de las oxidasas multicobre. Catalizan la oxidación de un amplio rango de compuestos aromáticos en un proceso acoplado a la reducción del oxígeno molecular a agua. Su presencia ha sido descrita en plantas, hongos, insectos, bacterias y arqueas, habiendo sido implicadas en multitud de procesos biológicos diferentes. El hecho de que estas enzimas posean una gran versatilidad catalítica, potenciada por la participación de compuestos mediadores de oxidación, ha suscitado entre los investigadores un gran interés debido a su potencial aplicación en numerosas industrias tecnológicas. En este trabajo se ha abordado el estudio del potencial oxidativo de la cepa Streptomyces cyaneus CECT 3335, productor de una lacasa denominada SclA, tanto a través de la puesta a punto de sistemas lacasa-mediador, como mediante la inducción de radicales hidroxilo a través de un ciclo redox de quinonas, considerado este último como un proceso microbiano de oxidación avanzada. Ambas estrategias demostraron ser altamente eficaces en la degradación de los colorantes textiles. Además, el proceso microbiano de oxidación avanzada permitió la completa destoxificación de los colorantes seleccionados. El interés biotecnológico y medioambiental suscitado por la lacasa SclA, nos condujo a su posterior caracterización molecular y sobreexpresión heteróloga en Escherichia coli, lo que permitió comparar la secuencia del gen con las correspondientes a otras lacasas bacterianas. Por otro lado, se pudo disponer de la enzima recombinante en forma soluble y llevar a cabo una caracterización físico-química y cinética de la misma. Esta caracterización puso de manifiesto su gran estabilidad al pH y la temperatura, así como un incremento de su afinidad por el sustrato ABTS respecto a la enzima nativa. Por último, con el fin de elucidar la función biológica desempeñada por la lacasa SclA, caracterizada en este trabajo, en el microorganismo productor, se obtuvo un mutante no productor de lacasa (SclA-) mediante disrupción génica. Los resultados obtenidos no permitieron atribuir de manera concluyente ninguna de las funciones analizadas (morfogénesis, pigmentación de esporas, resistencia al cobre y degradación de la lignina) a la enzima producida.
- English
The ability of a laccase (EC 1.10.3.2) produced by Streptomyces cyaneus CECT 3335 to decolourise and detoxify azo dyes was assessed. Results showed that a colour loss of 90% was achieved only in the presence of acetosyringone (0.1 mM) acting as a redox mediator for the laccase. Toxicological analysis of the decolourised dyes revealed that there was no direct correlation between decolouration and detoxification; in fact, in the case of the dyes Methyl Orange and Orange II, a significant increase in toxicity was produced after the treatment. In contrast, a significant decrease in toxicity was observed after the decolouration of New Coccine and Chromotrope 2R. Finally, HPLC analysis of the dyes after treatment revealed the complete disappearance of both dyes and mediator and a concomitant appearance of new chromatographic peaks which could be responsible of the residual toxicity detected in some cases.
- español
