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Expresión y purificación del receptor hVDR y química preliminar para el estudio de su zona activa por marcaje de fotoafinidad

  • Autores: Ana Isabel Fernandez Gacio
  • Directores de la Tesis: Antonio Mouriño Mosquera (dir. tes.)
  • Lectura: En la Universidade de Santiago de Compostela ( España ) en 1999
  • Idioma: español
  • Tribunal Calificador de la Tesis: Rafael Suau Suárez (presid.), Antonio Entrena López-Peña (secret.), Michael Breitenbach (voc.), Claudio Palomo Nicolau (voc.), Manuel Freire Rama (voc.)
  • Materias:
  • Texto completo no disponible (Saber más ...)
  • Resumen
    • En este trabajo de Tesis se ha llevado a cabo la donación del marco de lectura del receptor humano del calcitriol en un vector de expresión de E. coli, creando el plásmido pMW172-hVDR.

      Se ha expresado el receptor hVDR en la cepa de E. coli BL21(DE3), transformada con pMW172-hVDR, y se ha establecido un procedimiento de solubilización y purificación del receptor así expresado, que permite obtener el hVDR en cantidades de multimilígramos y con un grado de pureza del 85-90%.

      Se han diseñado y sintetizado, vía ruta convergente de Lythgoe, cuatro nuevos análogos del calcitriol de cadena lateral semirrígida: (17Z-1alfa-20-(4-(dimetilhidroxietil) fenil)-17,20-dideshidro-21,22,23,24,25,26,27- heptanor-vitamina D3, (17E)-1alfa-20(4-(dimetilhidroximetil) fenil)-17,20-dideshidro-21,22,23,24,25,26,27- heptanor-vitamina D3, (17Z)-1alfa-20(3-(dimetilhidroximetil) fenil)-17,20-dideshidro-21,22,23,24,25,26,27- heptanor-vitamina D3, (17E)-1alfa-20-(3-(dimetilhidroximetil) fenil)-17,20-dideshidro-21,22,23,24,25,26,27- heptanor-vitamina D3.

      Se han sintetizado dos nuevos análogos del calcitriol con una cadena lateral aromática con posibilidad de rotación del enlace C-17(20): (17beta)- 1alfa-20-(4-(dimetilhidroximetil) fenil)-21,22,23,24,25,26,27-heptanor- vitamina D3,(17beta)-1alfa-20-(3-(dimetilhidroximetil)fenil) -21,22,23,24,25,26,27-heptanor-vitamina D3 Se ha desarrollado la ruta de síntesis del primer ejemplo de un análogo fotolábil del calcitriol que incorpora un residuo diazirínico: (17Z)- 1alfa-20-(3-((trifluorometil) -3H-1,2-diaziren-3-il)fenil)-17,20-dideshidro- 21,22,23,24,25,26,27-heptanor-vitamina D3. Este análogo es de potencial interés para el marcaje de fotoafinidad del receptor hVDR.

      Se ha llevado a cabo un estudio preliminar de las conformaciones de las cadenas laterales de los análogos semirrígidos sintetizados, con el objeto de establecer una correlación entre la posición del hidroxilo de la cad


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