Aislamiento, purificación y caracterización molecular y cinética de la enzima glutation reductasa de hígado de caballo

• Autores: Concepcion Garcia Alfonso
• Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 1987
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Juan López Barea (presid.), Jesús Díez Dapena (secret.), Germán Soler Grau (voc.), Manuel José López Pérez (voc.), María Carmen Pinto Corraliza (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Enzimología
      • Biología molecular
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• Resumen

  • La glutation reductasa de hígado de caballo ha sido purificada a homogeneidad en un proceso basado fundamentalmente en cromatografias de afinidad. El rendimiento del proceso fue del 47% obteniéndose una enzima con 246 u/mg de proteína tras una purificación de 11.174 veces. La glutation eductasa de hígado de caballo presenta un espectro típico de flavoproteína habiéndose calculado un peso molecular de 107.100 daltons y un coeficiente de fricción de 1 315. La enzima presenta una km aparente de 8 88 um para el nadph y de 683 um para el nadh siendo mucho más efectivo el primero de ellos como donador de electrones resultando también muy eficiente el deamino-nadph. La enzima es muy específica para el gssg como aceptor de electrones con una k'm = 59 um. La actividad diaforasa de la glutation reductasa ha sido determinada con dpip y ferricianuro como aceptores de electrones suponiendo un 1 3% de la actividad con gssg. La enzima de hígado de caballo se inactiva por incubación en presencia de compuestos reductores en un proceso dependiente del tiempo y de la temperatura. La enzima es mas sensible al tratamiento con nadh que frente al nadph. La inactivación de la enzima se protege por compuestos capaces de oxidar a la enzima como ferricianuro y gssg por los piridin nucleotidos oxidados y por los compuestos tiolicos como gsh y dtt. El gsh además es capaz de inactivar por si solo a la enzima en un proceso que se protege por gssg. El edta protege muy efectivamente a la enzima de la inactivación por nadph. La glutation reductasa de hígado de caballo inactivada recupera su actividad por tratamiento con compuestos capaces de oxidar a la enzima y por tioles mediante dos procesos cinéticamente distintos para los que no se requiere la presencia de cationes metálicos libres.