Resumen de Acumulacion de k+ y salida de na+ en saccharomyces cerevisiae. Aislamiento de dos genes determinantes de estos procesos
Se ha clonado el gen trk1 que determina una proteina implicada en la entrada de de k+ en saccharomyces cerevisiaes. este gen se ha delecionado e interrumpido, sustituyendo la region central del mismo por el gen leu2 de levaduras. el gen nulo trkl:leu2 se utilizo para sustituir al gen trk1 de una cepa salvaje. la cepa mutante aunque tenia afectada la afinidad por el k+ y la representacion de arrhenius para la entrada de rb+, conserva similitudes con la cepa salvaje de la cual procede. esto indica que el sistema de entrada de k+ es muy complejo y en ausencia de la proteina trk1 el sistema es funcional aunque defectivo.
Manteniendose muy bajo el k+ externo, se ha medido entrada neta del cation existiendo unos potenciales de difusion de -350 mv a ph 6,0 y de -250 mv a ph 3,0. estos potenciales son mas negativos que los potenciales de membrana medidos en hongos, por lo que la entrada de k+ no puede explicarse por un canal, siendo mas probable la existencia de un simporte k+-h+ como mecanismo para la entrada de k+.
El estudio de una cepa de cleccion sensible a na+ y a li+, mostro que este fenotipo venia dado porque la cepa carecia del sistema para la salida de estos cationes, y que este defecto venia dado por una mutacion en un gen ena1 independiente del gen trk1. por complementacion de un mutante ena 1.1 con una genoteca genomica de levaduras, se aislo un plasmico que portaba el gen ena1.
La transformacion con este plasmido confiere a los mutantes resistencia a na+ y a li+ y una salida normal para estos cationes.
