Enfermedad de chagas cronica. Reaccion de polimerasa en cadena (pcr) aplicada al diagnostico y evaluacion quimioterapeutica

• Autores: Inés Zulantay
• Directores de la Tesis: Antonio Osuna Carrillo de Albornoz (dir. tes.), Werner Apt Baruch (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Granada ( España ) en 2005
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Antonio Fernández Martínez (presid.), Manuel Sánchez Moreno (secret.), Santiago Hernández Rodríguez (voc.), Francisco A. Rojo Vázquez (voc.), José María Alunda Rodríguez (voc.)
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• Resumen

  • La enfermedad de Chagas crónica se caracteriza por presentar parasitemias sub-patentes y escaso parasitismo tisular. En Chile, hasta hace algunos años, el diagnóstico parasitológico y la evaluación de tratamiento en esta fase de la enfermedad se realizaba exclusivamente mediante xenodiagnóstico (XD). La Reacción de Polimerasa en Cadena (PCR) y la posterior hibridación de los productos amplificados con sondas de kDNA de Trypanosoma cruzi, abrieron nuevas perspectivas para el diagnóstico, evaluación quimioterapéutica y el estudio de diversos aspectos básico-clínicos de la afección. Los objetivos planteados en este estudio fueron: establecer, en seguimiento prolongado, la sensibilidad de PCR en chagásicos crónicos tratados y posterior hibridación de los productos de PCR con sonda de kDNA de T. cruzi con P32, en comparación con los resultados de XD; correlacionar, siete años post-terapia, la presencia o ausencia de T. cruzi determinada por PCR, XD e hibridación, con la condición electrocardiográfica; evaluar, en comparación con la observación microscópica, la sensibilidad y precocidad de PCR aplicada en deyecciones de triatominos alimentados sobre chagásicos crónicos mediante XD y la complementariedad de ambas técnicas. Finalmente, determinar, diez años post-terapia, si existe asociación entre la positividad de XD y PCR y algunos antecedentes epidemiológicos relacionados con el hábitat intradomiciliario de Triatoma infestans. Todos los individuos procedían de zonas de endemia chagásica bajo control anti-triatomínico y participaron en este estudio bajo consideraciones éticas y consentimiento informado. Se evidenció mediante PCR y posterior hibridación, una banda de 330 pb de kDNA de T. cruzi en el 60% y 53% de los chagásicos crónicos tratados con itraconazol y alopurinol, respectivamente y cuyo XD era negativo (p>0.0001). Siete años post-terapia, se demostró la independencia entre la presencia o ausencia de T. cruzi determinada por XD, PCR e hibridación y la condición electrocardiográfica. Con respecto a la cardiopatía, se observó un 90% y 88% de prevención, 58% y 50% de regresión y 10% y 13% de progresión en los grupos con y sin parasitemia, respectivamente (p>0.05). Por otra parte, en casos XD positivo, el PCR demostró mayor precocidad que la observación microscópica, al detectar la banda de 330 pb de kDNA de T. cruzi en el 92% y 100% de los casos, a los 30 y 60 días de incubación de los triatominos, respectivamente. El XD, para los mismos períodos, presentó positividades del 44% Y 84% (p=0.001). PCR presentó además mayor sensibilidad, al detectar al parásito en el 36% de los casos con XD negativo. Ambas técnicas demostraron su complementariedad, puesto que a los 30 días, el 48% tuvo PCR positivo mientras el XD fue negativo. Finalmente, se demostró mediante XD y PCR, que la persistencia del parásito en pacientes tratados, no está relacionada con la presencia de T. infestans domiciliario. Los resultados de este estudio, han confirmado las ventajas de la aplicación de nuevas técnicas de biología molecular, como el PCR e hibridación, en el estudio de entidades complejas, como lo es la relación hospedador-T.cruzi en la enfermedad de Chagas crónica. Al mismo tiempo, nos han permitido plantear nuevas hipótesis de trabajo, que esperamos nos permitan seguir contribuyendo al conocimiento de esta afección.