Proliferación y apoptosis en hepatocitos en cultivo, protimosina alfa y gliceraldehído 3 fosfato deshidrogenasa

• Autores: Luciana Fernanda Barbini Vega
• Directores de la Tesis: Felix Vega Lisi (dir. tes.), Fernando Domínguez Puente (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidade de Santiago de Compostela ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Luis Felipe de la Cruz Palomino (presid.), Mercedes Rodríguez Vieytes (secret.), Joaquín Rodríguez (voc.), Federico Mallo Ferrer (voc.), José Antonio Villamarín Cid (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
      • Proteínas
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
      • Cultivo celular
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• Resumen

  • El estudio de los procesos de proliferación y apoptosis en el hígado es de gran importancia debido a que su desregulación genera un amplio número de enfermedades hepáticas. En este trabajo de tesis es estudió la participación de dos proteínas (protimosina alfa, PTA y gliceraldehído 3 fosfato deshidrogenasa, GAPDH) en los procesos de proliferación y apoptosis hepática. El mayor conocimiento acerca de la participación de estas proteínas en estos proceso, permitirán desde la investigación básica aportar en el entendimiento de las patologías del hígado y contribuir a la prevención, el diagnóstico o tratamiento de las mismas.

    Para esto, y en primer lugar, se establecieron los sistemas de hepatocios primarios y de línea celular en cultivo, se indujeron a proliferar con HGF, se determinaron las condiciones óptimas de esta inducción, y se pusieron a punto métodos de determinación de la proliferación celular.

    Por otro lado, se indujo la apoptosis de los hepatocios con dos agentes (TGF-beta1 y cicloheximida), se determinaron las condiciones óptimas de esta inducción, y se pusieron a punto las metodologías de determinación de apoptosis. Se estudiaron los niveles de RNA menajero de la PTA (por Northern Blot) en la quiescencia, la apoptosis y la proliferación celular, determinándose que existe un aumento de la expresión de esta proteína en la proliferación y una disminución en la apoptosis.

    Para la GAPDH se estudió su expresión a nivel de proteína en extractos proteicos nucleares y citoplasmáticos, mediante la técnica de Western Blot.

    La expresión del GAPDH resultó aumentada en los núcleos apoptóticos y en los citoplasmas proliferantes y apoptóticos.

    Para estudiar la localización de estas proteínas en los distintos estados celulares (quiescencia, proliferación y apoptosis) se realizó una inmunocitoquímica que se observó al microscopio confocal. Mediante esta técnica se localizó a la PTA en l