Integración de la genómica en la modelización de los tumores neuroblásticos = Integration of genomics in neuroblastic tumors modeling

• Autores: A.P. Berbegall
• Directores de la Tesis: Rosa Noguera Salvá (dir. tes.), Samuel Navarro Fos (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 2015
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Carlos Monteagudo (presid.), Enrique de Alava (secret.), Schleiermacher Gudrun (voc.)
• Calificación: Sobresaliente Cum Laude
• Materias:
  • Ciencias médicas
    • Patología
      • Oncología
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: RODERIC
• Resumen

  • *Introducción: El neuroblastoma es un tumor maligno embrionario del sistema nervioso simpático con una gran heterogeneidad en la presentación clínica, morfológica y genética y en otras características biológicas. La estratificación de grupos de riesgo pretratamiento se basa en los siguientes factores: edad, estadio, histopatológica del tumor, estado del oncogén MYCN, integridad del brazo cromosómico 11q y ploidía. Por otra parte, los cambios numéricos y estructurales detectados en el perfil genético se han incluido recientemente en la estratificación terapéutica de los pacientes con bajo riesgo a recaer o morir. El amplio espectro clínico de la enfermedad va desde pacientes con neuroblastoma en estadio 1, 2, 3 y 4S, generalmente caracterizados por su pronóstico favorable, a pacientes con tumores en estadio 4 con una mala evolución de la enfermedad, clasificados como pacientes de alto riesgo. Por otra parte se han descrito cohortes de neuroblastoma con unas características clínicas y biológicas inusuales y con baja prevalencia. Típicamente el neuroblastoma se diagnostica en la época neonatal y en bebés menores de un año y generalmente el oncogén MYCN se encuentra amplificado en aproximadamente el 25% de todos los casos. El diagnóstico en pacientes mayores de 10 años, la coexistencia de la amplificación de MYCN y deleción del brazo 11q o la amplificación heterogénea de MYCN son fenómenos infrecuentes. En los neuroblastomas de alto riesgo y en los raros grupos mencionados se necesitan de forma urgente investigaciones dirigidas a la identificación de nuevos enfoques terapéuticos para lograr una mejora de la evolución de la enfermedad. Una mejor caracterización de los diferentes grupos pronóstico y la identificación de nuevas dianas terapéuticas en el tumor y células del estroma, y en los elementos de la matriz extracelular dará lugar a terapias más adecuadas. Hasta la fecha son pocos los estudios que han determinado de forma precisa la frecuencia y detallado las alteraciones genéticas en neuroblastomas de pacientes adolescentes y adultos, o en neuroblastomas con amplificación atípica de MYCN y por tanto, están lejos de aportar estrategias tangibles para el cuidado de los pacientes. Sin embargo, ampliar esta información es crucial para identificar nuevos enfoques terapéuticos mediante la minería de datos. *Objetivos generales: En esta tesis perseguimos describir las características biológicas de tres grupos infrecuentes de tumores neuroblásticos identificando las alteraciones genéticas de cada grupo con el fin último de facilitar grandes estudios multicéntricos que puedan lograr una terapia más precisa de los pacientes. *Objetivos específicos: - Buscar patrones dependientes de la edad avanzanda en el neuroblastoma, asociados con características biológicas particulares, en una cohorte de pacientes mayores de 10 años al diagnóstico. El estudio está centrado en: 1) Determinar los patrones de alteraciones cromosómicas segmentarias mediante la técnica de micromatrices de polimorfismos de un único nucleótido. 2) Investigar la infiltración de las células del sistema inmune en el tejido tumoral mediante la expresión inmunohistoquímica de marcadores celulares (CD4, CD8, CD20, CD11b, CD11c y CD68). 3) Evaluar la expresión de la proteína ATRX mediante inmunohistoquímica. - Determinar el perfil genético de tumores neuroblásticos con dos alteraciones genéticas agresivas: la amplificación del oncogén MYCN y deleción de la región cromosómica 11q, poniendo énfasis en: 1) Identificar las alteraciones cromosómicas segmentarias y definir sus puntos de ruptura cromosómica. 2) Definir las regiones más pequeñas de solapamiento de las alteraciones segmentarias. 3) Describir la heterogeneidad intratumoral de los cambios cromosómicos presentes en este grupo tumoral. - Describir las características genéticas de los tumores neuroblásticos con amplificación heterogénea del oncogén MYCN. La descripción genética se basa en: 1) Identificación de los patrones de alteraciones cromosómicas segmentarias y de los puntos de ruptura cromosómica. 2) Comparación de los perfiles genómicos y de determinados puntos de ruptura cromosómica entre los tumores con amplificación heterogénea de MYCN y los subgrupos genéticos agresivos de neuroblastoma (con y sin amplificación homogénea de MYCN y deleción de 11q). *Metodología: El presente trabajo de tesis doctoral es un compendio de tres artículos científicos, en los que la candidata es la primera autora o primera coautora, que tratan sobre tumores neuroblásticos infrecuentes. En el texto del compendio de tesis hemos usado el término ultra-raro para referirnos al conjunto de tumores neuroblásticos caracterizados. Los artículos que constituyen el compendio son los siguientes: 1. Genetic instability and intratumoral heterogeneity in neuroblastoma with MYCN amplification plus 11q deletion. Eva Villamón,*, Ana P. Berbegall,*, Marta Piqueras, Irene Tadeo, Victoria Castel, Anna Djos, Tommy Martinsson, Samuel Navarro, and Rosa Noguera. * Equal contribution. PLoS One, 2013;8(1): e53740. 2. Neuroblastoma after Childhood: Prognostic Relevance of Segmental Chromosome Aberrations, ATRX Protein Status, and Immune Cell Infiltration. Ana P. Berbegall, Eva Villamón, Irene Tadeo, Tommy Martinsson, Adela Cañete, Victoria Castel, Samuel Navarro and Rosa Noguera. Neoplasia, 2014; 16(6): 471-480. 3. Comparative genetic study of intratumoral heterogenous MYCN amplified neuroblastoma with aggressive genetic profile neuroblastic tumors. Ana P. Berbegall, Eva Villamón, Marta Piqueras, Irene Tadeo, Anna Djos, Peter Ambros, Tommy Martinsson, Inge Ambros, Adela Cañete, Victoria Castel, Samuel Navarro and Rosa Noguera. Oncogene, 2015; Aceptado para su publicación, Abril 2015. Como se razona a continuación, los artículos reúnen tres desafíos en la investigación del neuroblastoma: 1. Centrarse en una cohorte minoritaria de pacientes afectos de neuroblastoma. Dentro de la enfermedad neuroblástica, considerada como una entidad rara (ORPHA635, http://www.orpha.net/), existen grupos clínica y biológicamente ultra-raros, en los que es necesaria una mayor investigación. La clínica de los pacientes con tumores ultra-raros es problemática, el tratamiento en estos pacientes con mucha frecuencia supone un dilema y todo el proceso de la enfermedad se vuelve más complejo. El escaso avance experimentado en el conocimiento de estos tumores no ha contribuido a la mejora de la supervivencia ni al desarrollo de tratamientos más adecuados. Por lo tanto, a pesar de la infrecuencia de estos tumores su investigación posee un gran valor. 2. Proponer una gestión más adecuada de las muestras. Dado que los grupos ultra-raros de neuroblastoma han sido a menudo excluidos o considerados como parte de otros grandes grupos de neuroblastomas con características clínicas y biológicas distintas a estos, la determinación de sus características biológicas se ha visto comprometida. Además, la escasez de la muestra tumoral disponible para realizar los estudios de investigación dificulta consensuar el papel de los análisis genéticos en la estratificación de riesgo terapéutica. Es crucial resaltar la importancia de la recogida metódica de la mayor cantidad de tejido tumoral posible para ser analizado secuencialmente por hibridación in situ fluorescente y por técnicas pangenómicas para determinar la presencia de heterogeneidad genética intratumoral. Considerar a estos tumores como entidades especiales con protocolos específicos para el manejo de las muestras beneficiaría su diagnóstico e investigación. 3. Considerar la utilidad potencial de los datos. La pretensión final del trabajo de tesis es contribuir a la recogida de datos y modelización del neuroblastoma. La descripción genética de estas cohortes facilitará la consecución de grandes estudios multicéntricos que son necesarios para coordinar proyectos clínicos. La ausencia de consenso diagnóstico respecto a los grupos de edad avanzada, una relativa falta de atención a los casos de neuroblastoma con amplificación atípica de MYCN, la escasez de la muestra tumoral y la heterogeneidad genética intratumoral son limitaciones que se pueden superar en el marco de los estudios multicéntricos almacenando adecuadamente los datos. Los tumores neuroblásticos ultra-raros debido a sus características biológicas singulares también pueden servir como modelos que proporcionarían conocimiento preciso sobre la patogénesis del neuroblastoma. *Conclusiones: Los estudios presentados son de relevancia para nuevos enfoques terapéuticos específicos y para generar estrategias de colaboración que permitan desarrollar propuestas de ensayos clínicos adecuadas.