Resumen de Leucemia linfática crónica B: una enfermedad heterogénea. Estudio del rol de las mutaciones de IgVH y BCL-6 en esta heterogeneidad: aproximaciones genómica y funcional.
RESUMEN La leucemia linfática crónica B (LLC-B) presenta un comportamiento clínico variable. Los pacientes sin mutaciones en la región variable del gen de la cadena pesada de las inmunoglobulinas (IgVH) sufren una enfermedad agresiva con menor tiempo libre de progresión y supervivencia global que los pacientes con IgVH mutado. Además, las mutaciones en el gen BCL6 proveen información clínica valiosa, permitiendo identificar un subgrupo de pacientes con alto riesgo de progresión, a pesar de tener mutaciones en IgVH. Sin embargo, el conocimiento de la biología subyacente en estos subgrupos moleculares de LLC-B aún no ha sido completamente dilucidado. El objetivo de este trabajo es el de valorar la implicación de las mutaciones en IgVH y BCL-6 como responsables de la heterogeneidad en el comportamiento biológico y expresión génica en la LLC-B en pacientes en estadío temprano de la enfermedad, para luego integrar la información obtenida con el fin de hallar genes y/o rutas metabólicas implicados e identificar posibles dianas diagnósticas/ pronósticas en LLC-B. Los estudios funcionales en células de LLC-B indican que, la inducción de apoptosis in vitro por Bortezomib (inhibidor de proteasoma) es estadísticamente diferente cuando las muestras se agrupan de acuerdo al estdo mutacional del gen BCL6, en el grupo de muestras mutadas en IgVH. Además, pudimos demostrar que esta inducción de apoptosis es dependiente del tiempo, de la dosis del fármaco utilizado, y de la activación de caspasas. Avanzando sobre los mecanismos que pudieran ocasionar un fracaso terapéutico, mediante modelos de co-cultivos, hemos comprobado que tanto células dendríticas como de estroma medular, son capaces de proteger a las células de LLC de la inducción de apoptsis por Bortezomib. En el estudio transcriptómico, encontramos unos 150 genes con expresión diferencial de acuerdo al estado mutacional de IgVH, mientras que no pudimos identificar ninguna diferencia significativa de acuerdo a las mutaciones en BCL6. Un grupo de 15 genes fueron escogidos para validar nuestros resultados, y cuantificamos su expresión por PCR cuantitativa a tiempo real, corroborándose los hallazgos obtenidos en el estudio de microarrays. Además, el uso de herramientas bioinformáticas para asignar perfiles funcionales, permitió distinguir cambios de expresión de manera coordinada en grupos de genes pertenecientes a la determinadas vías KEGG o agrupados dentro de un mismo término de ontología génica. La identificación de nuevos marcadores pronósticos en LLC fue el siguiente paso realizado en este estudio, para lo cual utilizamos un grupo muestral independiente para validar biológicamente los hallazgos provenientes del estudio de perfiles de expresión. Así, mediante el uso de PCR cuantitativa a tiempo real demostramos que la expresión de LPL, ZAP70, CRY1, BCL7A, DUSP22/BCL7A o CD82/BCL7A, determinados en linfocitos CD19+, correlacionan con el estado mutacional de IgVH y con el tiempo libre de tratamiento en pacientes con LLC en estadíos tempranos. Nuestros resultados mostraron además que CRY1 exhibía muy buena sensibilidad y especificidad al ser utilizado como marcador subrogado del estudio mutacional del gen IgVH . CRY1 también resultó ser un excelente biomarcador de necesidad de tratamiento, pudiendo utilizarse sobre muestras de LLC sin necesidad de seleccionar linfocitos B, por lo que este marcador podría ser introducido en la práctica clínica debido a lo simple de su metodología de cuantificación que es menos laboriosa de realizar que el estudio mutacional de IgVH. En conclusión, los estudios de expresión génica señalan que existen subgrupos moleculares bien definidos dentro de la LLC-B, sobre todo en base al estado mutacional de IgVH. Existen varios genes cuya expresión podría utilizarse como marcador de pronóstico en LLC-B, siendo CRY1, un componente esencial del reloj biológico, uno de los que proponemos para ser incorporado en la práctica clínica. __________________________________________________________________________________________________
