Resumen de Estrategias de cultivo para optimizar la maduración in vitro de ovocitos de terneras prepúberes
Bladimir Lenin Córdova Veizaga
El potencial de desarrollo de los embriones producidos in vitro es afectado negativamente por un lado, a defectos en las cualidades intrínsecas de los ovocitos y por el otro, a las condiciones del medio de maduración in vitro. Así, el éxito de la maduración in vitro depende de la integridad de los factores intrínsecos en la maduración y la vitalidad nuclear y citoplasmática de los ovocitos, también a la adecuada combinación de los componentes empleados en el medio de maduración. En este sentido, el objetivo de esta tesis consistió en analizar la influencia de distintos componentes añadidos durante la maduración in vitro sobre la calidad del ovocito y el potencial de desarrollo del embrión, con la finalidad de mejorar el rendimiento en la producción in vitro de embriones de terneras prepúberes. En el primer trabajo, se evaluó los efectos de la adición del complejo Insulina-Transferrina-Selenio y Ácido ascórbico al medio de maduración in vitro de ovocitos de ternera prepúberes, ya que tienen un papel muy importante frente al estrés oxidativo producido en condiciones in vitro. Los resultados demostraron una mejora del potencial de desarrollo de aquellos ovocitos que fueron madurados solamente las primeras 12 horas en presencia de ITS y Ácido Ascórbico y las 12 horas restantes en un medio convencional, donde además se reveló una relación positiva entre el incremento del nivel de expresión de la ciclina B1, la distribución de los gránulos corticales hacia la periferia y la mayor tasa de blastocistos. En el segundo trabajo se analizó si la adición de leptina en distintas concentraciones incrementaba la tasa de blastocistos, porcentaje de apoptosis de las células del cúmulus y el nivel de transcripción de genes involucrados con la apoptosis y la competencia del ovocito. Los resultados indicaron que la adición de la leptina en los medios de maduración in vitro no incrementó el potencial de desarrollo embrionario, ni disminuyó los niveles de apoptosis en las células del cúmulus, existiendo un incremento en los niveles de apoptosis a mayor dosis de leptina. Por otro lado, las distintas concentraciones de leptina durante la maduración in vitro ocasionaron un bloqueo en la transcripción del receptor de la leptina (LEPR). En el tercer trabajo se propuso analizar durante la maduración in vitro la inhibición de una cisteína proteasa lisosomal, utilizando E-64 que es un inhibidor de la Catepsina B. Los resultados demostraron que la inhibición de la Catepsina B no incrementó el potencial de desarrollo embrionario, ni la calidad del embrión, incrementó los niveles de apoptosis en las células del cúmulus y la expresión de la proteína Catepsina B. Finalmente, la diferentes concentraciones de E-64 durante la maduración in vitro no produjo un efecto inhibitorio de la Catepsina B, probablemente relacionados a una degradación por aumento del estrés y el efecto tóxico de las altas concentraciones. En conclusión, nuestros estudios indican que la adición de moléculas como la leptina o E-64 durante la maduración in vitro de ovocitos de ternera prepúberes no mejora su capacidad intrínseca para el desarrollo embrionario. En cambio, los resultados obtenidos indican que es posible incrementar el porcentaje de blastocistos obtenido mediante la adición del complejo Insulina-Transferrina-Selenio y ácido ascórbico al medio durante las 12 primeras horas de maduración.
