Estudio molecular de genes implicados en hipoacusia no sindrómica autosómica recesiva mediante secuenciación Sanger y de nueva generación

• Autores: María Domínguez Ruiz
• Directores de la Tesis: Ignacio del Castillo Fernández del Pino (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2016
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Fernández Piqueras (presid.), José María Millán Salvador (secret.), María José Trujillo Tiebas (voc.), José Antonio López Escámez (voc.), Ángel Campos Barros (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Genética
    • Biología humana
      • Genética humana
    • Biología vegetal (botánica)
  • Ciencias médicas
    • Ciencias clínicas
      • Genética clínica
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • La hipoacusia es el trastorno neurosensorial más frecuente en humanos. Presenta una gran heterogeneidad genética, con 133 loci cartografiados y 90 genes identificados hasta la fecha, sólo para las formas no sindrómicas. En este trabajo nos hemos centrado en el estudio de los genes MYO7A, PCDH15, CDH23 y PJVK en una cohorte de pacientes con Hipoacusia No Sindrómica de herencia Autosómica Recesiva (HNSAR) en los que se habían excluido mutaciones en el locus DFNB1 (genes GJB2 y GJB6). Se utilizó el análisis de haplotipos para marcadores microsatélites, el análisis de heterodúplex de ADN en DHPLC y la secuenciación Sanger. De este modo, descubrimos las mutaciones responsables de la hipoacusia en el gen MYO7A (2 familias), en PCDH15 (3 familias), en CDH23 (2 familias) y en PJVK (3 familias). Este trabajo, unido a resultados previos de nuestro laboratorio nos ha permitido completar el primer estudio global de la epidemiología genética de la HNSAR en la población española (52 genes investigados en 140 familias).

    Por otra parte, hemos utilizado un panel de secuenciación masiva de genes de hipoacusia para investigar un grupo de 13 familias con HNSAR en las que se habían excluido mutaciones en el locus DFNB1. Encontramos las mutaciones causantes de la hipoacusia en 6 de las 13 familias. Con el fin de identificar nuevos genes implicados en HNSAR realizamos secuenciación de exoma completo de las 7 familias restantes y de 6 familias no elucidadas procedentes de nuestro estudio epidemiológico. En tres familias encontramos mutaciones en genes no incluidos en el panel y en otras dos familias hallamos mutaciones en dos genes implicados en hipoacusias sindrómicas. En total, en el curso de este trabajo hemos identificado 28 mutaciones patogénicas, 18 de ellas no descritas previamente.

    Por último, dado que no se puede acceder a los ARNm de oído interno en pacientes vivos, hemos estudiado la expresión de los genes implicados en HNSAR en tejidos de fácil muestreo (sangre, saliva y orina). Se investigaron cinco controles normoyentes (2 varones y 3 mujeres) mediante RT-PCR; dos de estos controles (un varón y una mujer) se estudiaron además por secuenciación masiva del ARN (RNA-seq). Los resultados obtenidos indican que casi la totalidad de los genes implicados en HNSAR se expresan en al menos uno de estos tejidos, mayoritariamente la sangre.