Análisis de la vía de NF-kB en células troncales de cáncer de ovario

• Autores: Carolina González Torres
• Directores de la Tesis: Vilma Maldonado Lagunas (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Nacional Autónoma de México ( México ) en 2018
• Idioma: español
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: ru.dgb.unam.mx
• Resumen
  • español

    El factor de transcripción nuclear kappa B (NF-kB), es uno de los principales factores de transcripción que ha sido relacionado con las células troncales de diversos tumores. Es poco lo que se conoce acerca de la asociación entre las células troncales tumorales y los reguladores cascada rio arriba de la vía de señalización de NF-kB y las células troncales tumorales de ovario, por lo que el principal objetivo de este estudio fue el detallar la importancia del efecto que tiene las vías de señalización de NF-kB canónica y no canónica en las características de las células troncales de líneas celulares de cáncer de ovario. Para ello se aislaron células troncales tumorales a partir de la línea celular SKOV3 de ovario mediante el marcador CD44. En estas células se cuantificaron los niveles de proteína y RNA mensajeros de genes asociados al fenotipo de células troncales tumorales, así como de genes de las vías de señalización de NF-kB. El fenotipo de las células troncales tumorales aisladas como subpoblación positiva a CD44 (CD44+) fue principalmente determinado a través de ensayos de clonogenicidad, formación de colonias, crecimiento independiente de anclaje, además de ensayos de formación de tumores in vivo. Se determinó que la subpoblación CD44+ presento altos niveles expresión de los genes relacionados con el fenotipo troncal tumoral, así como capacidad de formación de tumores. Además, se encontró que estas células presentaron alta expresión de RelA y RelB principales moléculas efectoras de la vía de señalización NF-kB, así como IKKa, una de las principales cinasas inductoras de ambas vías de activacion canonica y no canonica de NF-kB. Por lo que se realizaron ensayos de pérdida de función empleando shRNAs y una construcción que expresa una proteína con función de dominante negativo. El efecto de la inhibición de la vía canónica a través de la proteína dominante negativa de IkBa, fue una disminución en el número de células de la población CD44+, además del impacto en su fenotipo troncal y en su capacidad de formación de tumores. De acuerdo con estos resultados al inhibir la cinasa IKKa se observó una baja expresión de genes involucrados en el fenotipo de las células troncales tumorales de ovario CD44+. Esto es uno de los primeros trabajos que reporta la participación de varias moléculas que pertenecen a las vías de activación de NF-kB en el mantenimiento del fenotipo de las células troncales tumorales de ovario.

  • English

    Nuclear Factor kappa B (NF-kB) is one of the main transcription factors that has been related to the stem cells of various tumors. Little is known about the association between tumor stem cells and cascade regulators upstream of the NF-kB signaling pathway and ovarian tumor stem cells, so the main objective of this study was to detail the importance of the canonical and non-canonical NF-kB pathways in stem cells of ovarian cancer cell lines.

    To this, the tumor stem cells of the SKOV3 ovarian cell line were isolated by the marker CD44, in these cells the levels of protein and messenger RNA of genes associated to the tumor stem cell phenotype were quantified, as well as of the genes of the NF-kB pathway.

    The phenotype of tumor stem cells isolated as positive subpopulation to CD44 (CD44+) was mainly determined through clonogenicity, colony formation and anchorage independent growth assays, in addition to tumor formation assays in vivo. It was determined that the CD44+ subpopulation presented high expression levels of genes related to the tumor stem phenotype, as well as the capacity of tumor formation. It was found that these cells also showed high expression of RelA and RelB, main molecules of NF-kB signaling pathway, as well as IKKa, one of the main kinases that induces the activity of canonical and no canonical NF-kB pathways. Therefore, the loss of function assay was made using shRNAs and a construction that expresses a protein with a dominant negative function. The effect of the inhibition of the canonical pathway through the negative dominant protein of IkBa, was a decrease in the number of cells of the CD44+ population, in addition to the impact on its core phenotype and on its capacity for tumor formation.

    According to these results, inhibiting the IKKa kinase showed low expression of genes involved in the phenotype of CD44+ ovarian tumor stem cells. This is one of the first studies that reports the participation of several molecules that belong to the activation of NF-kB signaling pathways in the maintenance of the phenotype of the ovarian tumor stem cells.