Diseño y evaluación de tres oligonucleótidos para la detección de Leishmania por PCR

• Omar Cáceres Rey ^[1] ; Ysabel Montoya Piedra ^[1]
  1. [1] Instituto Nacional de Salud Centro Nacional de Salud Pública División de Biología Molecular
• Localización: Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública, ISSN-e 1726-4642, ISSN 1726-4634, Vol. 19, Nº. 3, 2002, págs. 109-116
• Idioma: español
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  • español

    La leishmaniasis afecta la salud pública en 88 países del mundo y representa un serio obstáculo para su desarrollo socioeconómico. Los métodos para diagnosticar la enfermedad toman tiempo y muchas veces son traumáticos para el paciente. Objetivo: Se aplicó PCR como método alternativo para el diagnóstico rápido de esta enfermedad. Materiales y métodos: A diferentes especies de Leishmania se les extrajo ADN genómico. Se diseñaron tres oligonucleótidos (LEISH 1, LEISH 2 y LEISH 3) dirigidos al extremo carboxilo terminal de la histona H2B de Leishmania (V.) peruviana cuya secuencia parcial sirvió para diseñar dichos oligos, los cuales fueron probados en un sistema de PCR. Resultados: Los oligonucleótidos amplificaron exitosamente regiones de 123 pb (LEISH 1 / LEISH 2) y 139 pb (LEISH 1 / LEISH 3) de esta secuencia parcial utilizada. La sensibilidad del PCR fue de hasta 1 fg de ADN purificado de L. (V.) peruviana y de 2 parásitos cuando se realizó la técnica de manera directa. La especificidad fue 100% (solo reconoció a Leishmania y no a Trypanosoma ni a humano). Los oligonucleótidos diseñados también amplificaron todas las especies de Leishmania evaluadas. Conclusión: El sistema de PCR diseñado puede ser aplicado en la detección del parásito a partir de cualquier tipo de muestra convirtiéndose en un método alternativo de diagnóstico de la enfermedad por su rapidez, especificidad y sensibilidad.

  • English

    Leishmaniasis affects public health in 88 countries of the world and represents an important obstacle for their socioeconomic development. The methods used to diagnose this disease take time and are frequently traumatic to the patient. Materials and methods Genomic DNA from different Leishmania species were extracted. The carboxi-end terminal of a partial sequence of the H2B histone of Leishmania (V.) peruviana was used to design three oligonucleotides (LEISH 1, LEISH 2, LEISH3) to design a PCR technique as an alternative method to diagnose this disease rapidly. Results: A PCR was performed with these primers, which amplified succesfully 123bp (LEISH 1/ LEISH 2) and 139bp (LEISH1/ LEISH3) of the partial sequence studied. The sensitivity of direct PCR was appropiate even when 1fg of purified DNA of L. (V.) peruviana and 2 parasites was used. The specificity was 100% in all Leishmania species analyzed and did not recognized neither Trypanosoma nor human DNA. Conclusions: The oligonucleotides designed could be used in the detection of parasite from different kind of samples like fresh blood with anticoagulant, biopsy and dermal scrapping. PCR has become an alternative method to diagnose leishmaniasis because of its speed, specificity and sensitivity.