Síntesis in vitro de la proteína de la envoltura del virus peruano de la fiebre amarilla

• Carlos Yábar V ^[1] ; Ysabel Montoya P ^[1]
  1. [1] Instituto Nacional de Salud Centro Nacional de Salud Pública División de Biología Molecular
• Localización: Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública, ISSN-e 1726-4642, ISSN 1726-4634, Vol. 18, Nº. 1-2, 2001, págs. 9-13
• Idioma: español
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    Objetivo: Sintetizar la proteína recombinante de la envoltura (Er) del virus peruano de la Fiebre Amarilla (FA) utilizando técnicas moleculares. Materiales y métodos: El gen de la proteína de interés fue amplificado por transcripción reversa - reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) y clonado en un vector plasmídico para ser analizado mediante secuenciamiento de ADN. El inserto de ADN fue subdonado en un vector de expresión para ser traducido a proteína. Se purificó la proteína mediante cromatografía de afinidad bajo condiciones denaturantes, siendo visualizada por electroforesis en SDS-PAGE. Resultados: Se sintetizó y purificó la pr E del virus de la FA. Presentó un peso de 66 kDa, y luego de tres horas de inducción a partir de 1x108 células (OD=0.5) se obtuvo 10 mg/mL de la proteína a miniescala. Conclusión: El análisis de la secuencia de aminoácidos demostró que Er podría ser un buen candidato a ser evaluado serológicamente y luego ser usado como herramienta de diagnóstico específico para la FA.

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    Objective: To synthesise envelope recombinant protein (Er) from Peruvian yellow fever virus (FA) by using molecular approaches. Materials and Methods: The gene that codes this protein was analysed by RT-PCR, then cloned into a plasmid vector and sequenced by using DNA sequencing. Later, the DNA insert was subdoned into an expression vector to be translated to protein. Results: The protein was purified through an affinity column under denaturing conditions and visualised by SDS-PAGE electrophoresis. Results: The recombinant protein was 66 kDa molecular weight and it was obtained about 10 mg/ml from 1x108 cell (OD=0.5) after three hours of induction. Conclusion: Amino acid sequence analysis showed that Er might be a good candidate to be tested using sera and then to be used as a specific yellow fever diagnosis tool.