Purificación de cinco isoformas de la hormona luteinizante bovina (bLH). Caracterización fisicoquímica, biológica e inmunológica

• MURCIA MEJÍA, CLARA ^[1] ; HERNÁNDEZ CERÓN, JOEL ^[1] ; GONZÁLEZ PADILLA, EVERARDO ^[1] ; PEREA MARTÍN, GERARDO ^[1] ; FALCÓN ALCÁNTARA, ANDRÉS ^[1]
  1. [1] Universidad Nacional Autónoma de México

     Universidad Nacional Autónoma de México

     México

     
• Localización: Veterinaria México, ISSN 0301-5092, Vol. 35, Nº. 2, 2004
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Purification of five bovine luteinizing hormone (bLH) isoforms. Chemical physical, biological and inmunological characterization
• Enlaces
  • Texto completo
• Resumen
  • español

    El estudio describe la purificación de cinco isoformas de lh a partir del extracto hipofi sario bovino. Las fracciones obtenidas a ph 6.8 y a ph 9.5 de la cromatografía de intercambio catiónico, se repurificaron en condiciones idénticas en deae-sephacel para obtener a la lh-i (1.2 mg/kg de hipófi sis) y las lh- ii (1.8 mg/kg), lh-iii (1.5 mg/kg) lh-iv (1.2 mg/kg) y lh-v (7.0 mg/kg), respectivamente. La movilidad relativa (rf) de cada isoforma se determinó por una electroforesis en geles de poliacrilamida. La lh-i presentó un rf de 0.16 cm; Las lh-ii, iii y iv de 0.044 cm y la lh-v de 0.11cm. El peso molecular (pm) de las lh-i y lh-v correspondió a 37.5 kilodaltones (kda), y de 38.5 kda para la lh-ii, lh-iii y lh-iv. El análisis por inmunotransferencia identifi có bandas de pm de 59.0, 37.5 y 22.0 kda en los estándares como en las isoformas. La potencia biológica in vivo correspondió a 1.04 u/mg (lh-i); 5.9 u/mg (lh-ii), 0.16 u/mg (lh-iii), 0.86 u/mg (lh-iv) y 1.4 u/mg (lh-v) y la concentración de lh por radioinmunoensayo (ria) a la dosis ed50 fue de 2.27 ng/tubo (lh-i), 1.19 ng/tubo (lh-ii), 1.35 ng/tubo (lh-iii), 0.66 ng/tubo (lh-iv) y 1.71 ng/tubo (lh-v). Los datos muestran la obtención de dos isoformas de elución a ph 6.8 (i y v) y tres isoformas a ph 9.5 (ii, iii y iv), con heterogeneidad de carga, diferente actividad biológica y concentración inmunorreactiva de lh en un sistema estándar, con rendimientos superiores para intentar el desarrollo de sistemas analíticos más precisos.

  • English

    The study describes the purification of five lh isoforms from bovine pituitary extracts. Cationic interchange chromatography was used to obtain fractions at a ph of 6.8 and 9.5. These were then repurified under identical conditions in deae-sephacel to obtain lh-i (1.2 mg/kg of pituitary), and lh-ii (1.8 mg/kg), lh-iii (1.5 mg/kg), lh-iv (1.2 mg/kg) and lh-v (7.0 mg/kg), respectively. The relative mobility (rf) of each isoform was determined using polyacrylamide gel electrophoresis under native conditions. Lh-i presented an rf of 0.16 cm; Lh- ii, lh-iii and lh-iv had an rf of 0.044 cm, while lhv had a 0.11 cm rf. The molecular weight (mw) of lh-i and lh-v was 37.5 kda, while lh-ii, lh-iii and lh-iv had a mw of 38.5 kda. The immunotransference analysis identified mw bands weighing 59.0, 37.5 and 22.0 kda in the standards as well as in the different isoforms. The in vivo biological potency corresponded to 1.04 u/mg (lh-i); 5.9 u/mg (lh-ii); 0.16 u/mg (lh-iii); 0.86 u/mg (lh-iv) and 1.4 u/mg (lh-v) and their lh radioinmmunoassay (ria) 50% expected dose (ed50) were 2.27 ng/tube (lh-i), 1.19 ng/tube (lh-ii), 1.35 ng/tube (lh-iii), 0.66 ng/tube (lh-iv) and 1.71 ng/tube (lh-v). These data show that it is possible to obtain two lh isoforms at ph 6.8 (i and v) and three at ph 9.5 (ii, iii and iv), with heterogeneous charges, ria and biological activity, with sufficient yield as to try to develop simpler and more precise analytical methods.