Evaluación del bioensayo de mtt para determinar la proliferacion in vitro de linfocitos de bovino frescos y congelados

• BAUTISTA GARFIAS, CARLOS RAMÓN ^[2] ; ACOSTA GARCÍA, ELIZABETH ^[2] ; TOLEDO GARCÍA, ICELA IVONNE ^[1]
  1. [1] Universidad Nacional Autónoma de México

     Universidad Nacional Autónoma de México

     México

     
  2. [2] INIFAP. Morelos. México
• Localización: Veterinaria México, ISSN 0301-5092, Vol. 31, Nº. 2, 2000
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Evaluation of the mtt bioassay to determine the in vitro proliferation of fresh and frozen bovine lymphocytes
• Enlaces
  • Texto completo
• Resumen
  • español

    Se llevaron a cabo cuatro experimentos para evaluar la proliferación in vitro (expresada como índice de estimulación, ie) de linfocitos de bovino, frescos y congelados, a concanavalina a (con a) o antígeno de anaplasma marginale, usando el bioensayo de mtt. En el primero, el ie de linfocitos de tres bovinos adultos en respuesta a con a fue determinado durante seis semanas consecutivas usando el ensayo de mtt que mostró resultados reproducibles; El ie osciló entre 1.7 y 3.8. En el segundo, los linfocitos de dos bovinos adultos fueron congelados a ""70°c durante seis semanas y su viabilidad fue evaluada semanalmente. La viabilidad promedio cambió de 99.5% (semana 0) a 89% en la semana cinco y disminuyó a 59% en la semana seis. En el tercero, el ie de linfocitos, frescos y congelados (tres semanas) de tres animales adultos, en respuesta a con a, fue determinado usando el bioensayo de mtt; El ie promedio fue de 2 y de 1.5 para los linfocitos frescos y congelados, respectivamente. En el cuarto, la proliferación de linfocitos de un animal adulto recuperado de la infección con a. Marginale y los de otro bovino adulto no infectado fueron probados contra un antígeno de a. Marginale y determinada por medio de las pruebas de mtt y de incorporación de timidina-h3. El ie obtenido fue similar, 1.7 para mtt y 1.5 para timidina-h3. Los resultados sugieren que el bioensayo de mtt y células congeladas pueden utilizarse como alternativas en la prueba de proliferación de linfocitos de bovino in vitro.

  • English

    Four experiments were carried out to evaluate the in vitro proliferation (expressed as stimulation index, si) of fresh and/or frozen bovine lymphocytes to concanavaline a (con a) and/or anaplasma marginale antigen using the mtt bioassay. In the first experiment, the si of lymphocytes from three adult bovines in response to con a was determined during six consecutive weeks using the mtt assay which showed reproducible results during this time. The si oscillated between 1.7 and 3.8. In the second one, the lymphocytes from two adult bovines were frozen at ""70° c during six weeks, and their viability was evaluated weekly. Mean viability changed from 99.5% (week 0) to 89% in week five, and dropped to 59% in the sixth one. In the third experiment, the si of fresh and frozen (three weeks) lymphocytes from three adult bovines in response to con a was evaluated using the mtt bioassay; The mean si was of 2 and of 1.5 for fresh and frozen lymphocytes, respectively. In the fourth experiment, the proliferation of lymphocytes from one adult animal recovered from a. Marginale infection, and those from one non infected adult bovine were tested against an a. Marginale antigen determined by the mtt assay, and the h3-thymidine uptake test. The si obtained was similar; 1.7 for the mtt and 1.5 for the h3-thymidine uptake. Results suggest that the mtt bioassay and frozen cells can be used as alternatives in the in vitro bovine lymphocyte proliferation test.