Caracterización y evaluación in vivo e in vitro del lipopolisacárido de aeromonas hydrophila

• AP JIMÉNEZ ^[1] ; CA IREGUI ^[1] ; J FIGUEROA ^[1]
  1. [1] Universidad Nacional de Colombia

     Universidad Nacional de Colombia

     Colombia

     
• Localización: Acta biológica colombiana, ISSN 0120-548X, Vol. 13, Nº. 2, 2008, págs. 147-162
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • In Vitro/In Vivo Characterization And Evaluation Of Aeromonas hydrophila Lipopolysacharides (LPS)
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• Resumen
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    A partir de una cepa de A. hydrophila aislada de un brote de enfermedad septicémica en Tilapia nilótica (Piaractus brachypomusoreochromis niloticus), se obtuvieron extractos de lipopolisacárido (LPS) crudo (29,5 mg/ml) y semipurificado (106,5 mg/ml) mediante la técnica fenol-agua caliente descrita por Westphal, Jann (1965). La presencia de proteína fue del 2,3% para el extracto crudo y de 0,1% para el semipurificado; la concentración de polisacáridos osciló entre el 15 y 26%. En electroforesis (SDS-PAGE) se observaron bandas de 14 Kd correspondientes al oligosacárido central y al lípido A del LPS. Tres ratones de 25-35 g fueron inoculados intraperitonealmente con 25 mg/Kg de LPS cru-do, a partir de la primera hora todos los animales mostraron erizamiento, taquipnea e inapetencia; microscópicamente se detectó congestión hepática y pulmonar, hemorragias pulmonares y renales, marginación leucocitaria en hígado y pulmón con predominio de polimorfo-nucleares neutrófilos (PMN) en todos los animales, mostrando un mayor efecto que el control inoculado con LPS de E. coli (Sigma®) a la misma concentración. In vitro el LPS crudo a concentración de 10, 20 y 30 µg/ml indujo proliferación de células mono-nucleares murinas (2 x 10 5 en 200 µl de medio DMEM) por incorporación de timidina tritiada; tanto el LPS control (E. coli), como el LPS crudo de A. hydrophila mostraron cuentas por minuto (CPM ) ascendentes de manera dosis dependiente, el LPS de A. hydrophila desencadeno una proliferación muy similar a la inducida por el control.

  • English

    Aeromonas hydrophila isolated from a septicemic disease outbreak in tilapia (Piaractus brachypomusoreochromis niloticus) was used to prepare crude (29.5 mg/ml) and semipurified (106.5 mg/ml) lipopolysacharide extracts (LPS) based on the phenol-hot water protocol (Westphal and Jann, 1965). Protein contents were 2.3% and 0.1% for the crude and the semipurified extracts, respectively, while the polysacharides ranged from 15 to 26%. SDS-PAGE showed 14 Kd bands for the central oligosacharide and lipid A of the LPS. Mice (n=3) (25 ~ 35 g) that were intraperitoneally injected (25 mg crude LPS) showed after the first hour bristled fur, tachypnea and loss of appetite. Congestion (liver, lung), hemorrhages (kidney, lung), leukocytes margination -mainly PMN neutrophils-(liver, lung) were the most remarkable microscopic features. These effects were more evident than those found in controls injected with E. coli LPS (Sigma®). Crude LPS at 10, 20 and 30 mg/ml induced In vitro proliferation of murine mononuclear cells (2 x 105 in 200 ml DMEM) by use of tritiated thymidine. Both the crude A. hydrophila and the control E. coli LPS extracts showed dosed-dependent increasing counts per minute. The A. hydrophila LPS elicited a proliferation very similar to the one induced by the control.