Evaluación de metodologías de extracción de ADN de plantas recalcitrantes

• Suazo Ubieta, Taryn ^[1] ; Miranda Calero, Samantha ^[1] ; Rivers Carcache, Ena ^[1] ; Lacayo Romero, Martha ^[1] ; Tenorio Juárez, Daniel ^[1]
  1. [1] Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua

     Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua

     Nicaragua

     
• Localización: Revista Torreón Universitario, ISSN-e 2313-7215, ISSN 2410-5708, Vol. 9, Nº. 24, 2020, págs. 45-57
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Evaluation of DNA extraction methodologies from recalcitrant plants
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• Resumen
  • español

    La obtención ácido desoxirribonucleico (ADN) purificado es un punto clave para el desarrollo de técnicas moleculares que permiten caracterizar una especie en estudio. Las matrices vegetales constituyen una de las muestras de mayor complejidad debido a los compuestos químicos que la forman y que muchas veces difieren su concentración en dependencia de la variedad en estudio; este es el caso de muestras recalcitrantes de variedades de cacao (Theobroma cacao) y café (Coffea arabica) donde la pérdida de ADN puede incluso ocurrir en la maceración de las muestras por fenolización del material. En el presente estudio se evaluaron tres kits comerciales disponibles mediante los cuales se obtienen excelentes recobros para variedades no recalcitrantes, así como también modificaciones realizadas a los protocolos tradicionales de Doyle & Doyle (1987) y Doyle & Doyle (1990). Los resultados obtenidos confirmaron el efecto de la variedad y la especie sobre el método de extracción, y de igual manera, que los métodos modificados pueden presentar mayor recobro y pureza que los kits comerciales para algunas especies vegetales.

  • English

    Obtention of high-quality purified deoxyribonucleic acid (DNA) is key for the subsequent application of molecular techniques during the characterization of species under study. In this regard, plant extracts can be challenging due to its complex metabolites composition and to the fact that often these chemicals concentration differs across varieties and even samples. This is, for instance, the case for recalcitrant samples of cocoa varieties (Theobroma cacao) and coffee (Coffea arabica), where DNA loss can occur during sample maceration due to phenolization. In this research, three commercial kits, already known by producing excellent recoveries for non-recalcitrant varieties, were evaluated. Additionally, the modification of traditional protocols [Doyle & Doyle (1987) and Doyle & Doyle (1990)] was also evaluated. Results obtained confirm the effect of variety and species on DNA extraction and for some species modified methods may yield DNA recovery and purity higher than those obtained by commercial kits.