Técnica simples, rápida e barata de isolamento e multiplicação de Phytophthora infestans
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Monica do Rocio Andrade [1] ; Aline José Maia
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Stephani Sloboda
[1]
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Cacilda Márcia Duarte Rios Faria
[1]
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Nilceu Ricetti Xavier de Nazareno
[2]
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Jackson Kawakami
[1]
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[1] Universidade Estadual do Centro-Oeste
Universidade Estadual do Centro-Oeste
Brasil
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[2] Instituto de Desenvolvimento Rural do Paraná. Brasil
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- Localización: Ciencia rural, ISSN 0103-8478, Vol. 54, Nº. 11, 2024
- Idioma: portugués
- Títulos paralelos:
- A simple, fast and cheap isolation and multiplication technique of Phytophthora infestans
- Enlaces
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Resumen
- English
In this study, we present a method for isolation and propagation of Phytophthora infestans, a challenging-to-isolate phytopathogenic oomycete. The procedure initiated with naturally infected potato leaves, which underwent a 30-minute sanitization under running water. Subsequently, healthy potato tubers were meticulously washed with a neutral detergent, sterilized using alcohol, and then flamed. Slices 4 mm thick were carefully cut out of the potato tubers. Slices were used to cover 2 x 4 mm sterilized leaf pieces cut from the border of two-day old young P. infestans lesions, within sterilized empty Petri dishes. The sealed plates were then transferred to BOD growth chambers set at 18 ºC in complete darkness for 5 days. At the end of this incubation period, the development of a sparse, white mycelium was observed on top of the potato slices. Using a Drigalski loop, the visible mycelium was carefully transferred to rye agar medium in Petri dishes. To avoid contamination, care was taken not no touch potato slices. After mycelium reaching the Petri dish border, and with aid of a Neubauer chamber, the inoculum density per plate was of 1.79 x 104 sporangia mL-1. Sporangia germination rate ranged from 69 to 78%. This isolation technique simplify in vitro production of P. infestans, enhancing the possibility for research with this important pathogen
- português
Neste estudo, apresentamos técnica de isolamento e multiplicação de Phytophthora infestans, oomiceto fitopatogênico de isolamento desafiador. O procedimento teve início com folhas de batata naturalmente infectadas, as quais foram higienizadas em água corrente por 30 minutos. Posteriormente, tubérculos de batata saudáveis foram lavados com detergente neutro, esterilizados em álcool e flambados. Em seguida, foram cortadas rodelas de 4 mm do tubérculo. As rodelas foram usadas para cobrir pedaços de 2 x 4 mm da borda de lesões foliares de P. infestans com dois dias, em placas de Petri vazias e esterilizadas. As placas foram seladas e transferidas para câmaras de crescimento do tipo BOD, mantidas a 18 ºC no escuro por cinco dias. Após esse período, observou-se o crescimento de micélio ralo de cor branca sobre as rodelas de batata. Utilizando alça de Drigalski, o micélio visível foi transferido para meio de centeio e ágar. Após o preenchimento da placa por P. infestans, estimou-se com câmara de Neubauer a concentração de 1,79 x 104 esporângios mL-1, com taxa de germinação variando entre 69 e 78%. Essa técnica de isolamento simplifica o processo de obtenção in vitro de P. infestans, contribuindo significativamente para pesquisas relacionadas a essa importante doença
- English
