Procedure for the isolation of DNA from clotted blood of birds

• Autores: José Luis Arcia, Alexis Márques, Oscar de la Rosa, Rafael Galíndez
• Localización: Archivos Latinoamericanos de Producción Animal, ISSN 1022-1301, ISSN-e 1022-1301, Vol. 32, Nº. 2, 2024, págs. 89-94
• Idioma: inglés
• Títulos paralelos:
  • Protocolo para extração de DNA de sangue coagulado de aves.
  • Protocolo para extracción de ADN a partir de sangre coagulada de aves
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  • Texto completo
• Resumen
  • español

    La obtención de muestras constituye una de las principales limitaciones en estudios moleculares, debido a esto, se estandarizó un procedimiento no enzimático para la extracción y purificación de ADN genómico de forma económica y segura a partir de muestras de sangre coagulada. Se muestrearon 227 individuos de las razas de gallinas criollas Venezolanas IPA, FAGRO y sus respectivos F1 y F2. La calidad del ADN se verificó por medio de electroforesis horizontal en un gel agarosa al 0,8 %. La idoneidad del ADN extraído se evaluó mediante la amplificación por PCR de los marcadores MCW0241 y LEI0122 a través de una electroforesis desnaturalizante en geles de poliacrilamida al 6 %. La concentración y pureza de los aislados de ADN se determinó mediante espectrofotometría a 260 nm, para un promedio de 2.288,12 ng/μL y 2,04 para la relación A260/A280. El procedimiento descrito permitió obtener ADN de buena calidad y en grandes cantidades de forma simple, confiable y económica

  • português

    A obtenção de amostras é uma das principais limitações em estudos moleculares, por isso, um procedimento não enzimático foi padronizado para a extração e purificação do DNA genômico de forma econômica e segura a partir de amostras de sangue coagulado. Foram amostrados 227 indivíduos das raças crioulas venezuelanas IPA, FAGRO e suas respectivas F1 e F2. A qualidade do DNA foi verificada por eletroforese horizontal em gel de agarose 0,8. A adequação do DNA extraído foi avaliada por amplificação por PCR dos marcadores MCW0241 e LEI0122 por eletroforese desnaturante em géis de poliacrilamida a 6%. A concentração e pureza dos isolados de DNA foram determinadas por espectrofotometria a 260 nm, para uma média de 2.288,12 ng/μL e 2,04 para a relação A260/A280. O procedimento descrito possibilitou a obtenção de DNA de boa qualidade e em grandes quantidades de forma simples, confiável e econômica

  • English

    In order to isolate genomic DNA economically and safely, from coagulated blood samples, to perform molecular genetic studies, the following protocol was optimized: approximately 250 μL of blood clot were taken, 400 μL of buffer was added cell lysis (10mmol / L Tris-HCl, pH 8.0, 10 mmol / L KCl, 10 mmol / L MgCl2, 2mmol / L EDTA, pH 8.0; 0.4 mol / L NaCl and 10g / L SDS) and it was left to incubate until the next day at room temperature. 350 μL of chloroform was added and stirred for 10 seconds, then 350 μL of 5M potassium acetate was added, stirred for 10 seconds and centrifuged for 10 minutes (14,000 g). The supernatant was transferred to new tubes and 700 μL of cold isopropanol was added, centrifuged for 5 minutes at 14,000 g and the supernatant discarded. Subsequently, two washes were performed with 70% ethanol (700 μL each), centrifuged for 5 minutes and the liquid was discarded. The sediment was dried 10 min at 45 0C and 8 min at 65 0C and then rehydrated with 20-25 μL TE-1X. The concentration and purity of the DNA isolates were determined by spectrophotometry at 260 nm for an average of 2288.12 ng / μL and 2.04 for the A260/A280 ratio. The suitability of the extracted DNA was evaluated by PCR amplification of the markers MCW0241 and LEI0122. The procedure described allowed to obtain DNA of good quality and in large quantities in a simple, reliable and economical way.