Studies on the pulmonary surface-active lipoprotein II. Biophysical characterization of its peptide moiety

• Autores: José Miguel Jiménez
• Localización: Revista de Biología Tropical, ISSN 0034-7744, Vol. 19, Nº. 1-2, 1971 (Ejemplar dedicado a: Volume 19 - Regular number 1-2 - July-December 1971; 1–2)
• Idioma: inglés
• Títulos paralelos:
  • Studies on the pulmonary surface-active lipoprotein II. Biophysical characterization of its peptide moiety
• Enlaces
  • Texto completo
• Resumen
  • español

    Estudios para establecer las características fisicoquímicas de la liproteína tensoactiva pulmonar fueron llevados a cabo. Se espera que los resultados de esta investigación pueden servir para compender mejor la naturaleza del agente tensoactivo pulmonar así como para extender nuestro conocimiento general de las lipoproteínas.Un estudio exhaustivo del constituyente péptido de la lipoproteína tenso· activa pulmonar fue realizado después de que los lípidos fueron removidos en su totalidad en material proveniente de pulmones bovinos.Se observó que los materiales lipoprotéicos pulmonares libres de lípidos son insolubles en agua destilada, así como en soluciones salinas fisiológicas con pH ácido o neutro. Son ligeramente solubles en cloruro de sodio 0.1 molar pH 10.0, Y completamente solubles en hidróxido de sodio 0.1 normal. El componente péptido de esta lipoproteína no es dializable.Los materiales libres de lípidos fueron concentrados mediante ultrafiltración en membranas Diaflo y purificados en columnas de Sephadex.Se observó que las propiedades del componente peptídico purificado son marcadamente influenciadas por el pH de los solventes, por ejemplo, el péptido en su estado isoeléctrico (pH 4-6) forma un gel que se dispersa con urea 6 molar. A pH mayores de 7.0 o menores de 4.0, se pudo observar trazas de material insoluble, quizás agregados. Se asume que las propiedades de solubilidad de este péptido están controladas, al menos parcialmente, por su carga neta.La ultracentrifugación y la electroforesis indican que las preparaciones del componente péptido estudiado son heterogéneas. Las electroforesis del péptido en tiras de acetato de celulosa mostraron dos bandas: un componente mayor de rápida migración electroforética, y un componente menor más lento, localizado cerca del punto de origen, que se considera constituye aproximadamente el 5 % del total del péptido. Los patrones de sedimentación en la ultracentrí fuga analítica mostraron dos comp onentes principales con constantes de sedimentación (S20,W) de 1.53S y 3.10S, cuyos pesos moleculares anhidros mínimos fueron estimados en 8,600 y 24,800 respectivamente (suponiendo una forma esférica).Los cálculos mostraron que el componente péptido de la lipoproteína tensoactiva pulmonar posee más grupos negativos que positivos en su constitución, lo que está de acuerdo con sus propiedades ácidas.Las determinaciones del peso molecular de este péptido arrojaron valores de 100,000 y 230,000, con base en su composición química y con base en datos derivados de experimentos de sedimentación-equilibrio en la ultracentrífuga. Tal discrepancia entre estos dos valores puede ser explicada asumiendo que una polimerización del componente péptido ocurre en solución, determinando así un valor más alto para el peso molecular medio establecido mediante sedimentación- equilibrio.

  • English

    5tudies on the lung surface-active lipoprotein complex were carried out in order to establish, primarily, the physicoehemieal eharaeteristies of its peptide moiety. It has been undertaken in the hope that new findings may extend present knowledge on the nature of the surfactant agent and of lipoproteins in general.After removal of lipids from the SA-lipoprotein, the peptide moiety of the cow lung SA-lipoprotein was subjeeted to an exhaustive characterization study.It was observed that the lipid-free materials are insoluble in distilled water, in acid, and in neutral physiological saline solutions. They are slightly soluble in 0.1 molar sodium ehloride solutions at pH 1 0.0, and soluble in 0.1 normal sodium hydroxide solutions. The delipidized 5A-peptide is not dialyzable.The soluble lipid-free materials were eoncentrated by ultrafiltration through Diaflo Membranes and purified by gel filtration in columns of Sephadex.It was observed that the properties of the purified SA-peptide material were markedly influenced by solvent pH. In the pH range 4-6, where the peptide was nearly isoelectric, it formed a gel, which could be dispersed by 6 molar urea. At pH values higher than 7.0 or less than 4.0, traces of insoluble, perhaps aggregated material were observed in the solutions. It is apparent that the solution properties of this peptide material are controlled, at least in part, by its net charge.Ultracentrifugal and electrophoretical data indicate that the SA-peptide preparations are heterogeneous. Two bands appeared after electrophoresis of SA-peptide on ceHulose acetate strips: one major fast-moving component; and a minor one, close to the origin, which constituted about 5 per cent of the total peptide. Sedimentation patterns in the analytical ultracentrifuge showed two main components, with sedimentation constants (S20 W ) of 1.53S and 3.10S, with minimal anhydrous molecular weights of 8,600 and 24,800 (assummg spherical shape), respectively.Calculations have shown that the SA-peptide contains more negative than positive groups, in accord with its acidic properties.Molecular weight determinations with SA-peptide materials have led to values of 100,000 and 230,000, on the basis of chemical composition and sedimentation equlibrium data, respectively. The discrepancy between these two values may be explained by assuming that polymerization of SA-peptide occurs in solution, leading to a high value for the weight-average molecular weight determined by sedimentation equilibrium.