Modelo de detección de anticuerpos neutralizantes contra IFN-β mediante citometría de flujo
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[1] Universidad de Los Andes
Universidad de Los Andes
Colombia
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- Localización: Biomédica. Revista del Instituto Nacional de Salud, ISSN-e 2590-7379, ISSN 0120-4157, Vol. 32, Nº. 4, 2012, págs. 617-622
- Idioma: español
- Títulos paralelos:
- Flow cytometry model for the detection of neutralizing antibodies against of IFN-β
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Resumen
- español
Introducción. El interferón beta (IFN-β) se usa para tratar la forma recaída-remisión de la esclerosis múltiple. Sin embargo, el uso de proteínas recombinantes como medicamentos puede generar la producción de anticuerpos, disminuyendo así la efectividad del tratamiento.Objetivo. Estandarizar una técnica de detección de anticuerpos neutralizantes contra IFN-β, mediante citometría de flujo.Materiales y métodos. Se cultivaron dos líneas tumorales humanas (U937 y K562) con IFN-β1a humano recombinante y mediante citometría de flujo se determinó la expresión de la proteína ISG15 intracelular. Los sueros se obtuvieron de un conejo Nueva Zelanda antes y después de la inmunización con 100.000 UI de IFN-β1a en adyuvante de Freund. Para la detección de anticuerpos neutralizantes, se estimularon células K562 con IFN-β1a preincubado con sueros de conejos a una dilución 1:20. Después de 24 horas de incubación se determinó la expresión de la proteína ISG15.Resultados. La expresión de ISG15 fue mayor en células K562 estimuladas. La intensidad media de fluorescencia para la ISG-15 entre células en ausencia IFN-β1a, mostró una mediana de 198 unidades arbitrarias (UA) (p25-75= 173-231 UA) y, en presencia de IFN-β1a, 430 UA (p25-75 =316-611,5), con una diferencia estadísticamente significativa (p=0,008). La presencia de anticuerpos anti-IFN-β1a en el suero del conejo inmunizado, hizo disminuir de forma acentuada la expresión de la ISG15 en células K562 cultivadas con IFN-β1a, en comparación con el control (mediana=3,040 UA Vs. 43,644 UA, respectivamente).Conclusiones. Este trabajo muestra la detección de anticuerpos neutralizantes contra IFN-β en conejos, utilizando la expresión de la proteína ISG15 por citometría de flujo. doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v32i4.637
- English
Introduction. Interferon beta (IFN-β) is a treatment for relapsing remitting multiple sclerosis. However, the therapeutic use of recombinant proteins induces a humoral immunologic response resulting in the induction of binding (BAb) or neutralizing (NAb) antibodies against the biological product. The presence of neutralizing antibodies has been associated with decreased IFN-β treatment efficacy.Materials and methods. Two tumor cell lines (K562 and U937) were cultivated with human recombinant IFN-β1a at different concentrations and lengths of time in order to measure the expression of intracellular ISG15, an inducible molecule in the IFN-β1a signaling cascade. Blood was obtained from non-immunized and IFN-β1a immunized (100,000 IU) New Zealand rabbits. The presence of BAbwas evaluated by ELISA. For NAb detection, sera 1:20 dilution were added to the IFN-β1a-stimulated cell lines, and ISG15 expression was evaluated by flow cytometry.Results. K562 cells provided the better cell line for the assay, stimulated with a dose of 1,000 IU ofIFN-β1a, and a 1:100 dilution for the primary antibody and a 1:200 dilution for the secondary antibody. ISG15 expression was compared between cells alone or cultivated with IFN-β1a. Mean fluorescence intensity (MFI) for ISG-15 expression median was 198 arbitrary units (AU) with interquartile ranges of173-231 AU for non-stimulated cells and 430 AU with interquartile ranges of 316-611.5 AU for IFN-β1a stimulated cells (p<0.01). Immunized rabbit sera decreased the expression of ISG-15 in K562 cells stimulated with IFN-β1a, whereas non-immunized rabbit sera did not.Conclusions. This rabbit model demonstrates that ISG15 expression evaluated with flow cytometry can be used as a detection assay for NAb. doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v32i4.637
- español
