Barnetobina: un nuevo principio coagulante purificado del veneno de la serpiente peruana Bothrops barnetti

• Dan Vivas Ruiz ^[1] ; Rosalina Inga Arellano ^[1] ; Julio Mendoza Fernández ^[1] ; Fanny Lazo Manrique ^[1] ; Amando Yarlequé Chocas ^[1]
  1. [1] Universidad Nacional Mayor de San Marcos

     Universidad Nacional Mayor de San Marcos

     Perú

     
• Localización: Revista de la Sociedad Química del Perú, ISSN-e 2309-8740, ISSN 1810-634X, Vol. 76, Nº. 3, 2010, págs. 261-270
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Barnetobin
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• Resumen
  • español

    Se ha aislado una enzima similar a trombina, barnetobina, del veneno de la serpiente peruana Bothrops barnetti, mediante dos pasos cromatográficos sobre CM Sephadex C-50 y Sephadex G-100, en ambos casos utilizando acetato de amonio 0,05 M a pH 5,0. La enzima fue purificada 45 veces con un rendimiento de 14% y por PAGE-SDS se obtuvo una sola banda proteica de 52 kDa en condiciones reductoras con 2β-mercaptoetanol y de 48 kDa en condiciones no reductoras, determinαndose que la enzima consta de una sola cadena polipeptνdica con al menos un enlace disulfuro. El tratamiento con N- glicosidasa (PNGasa F) determinσ que es una glicoproteνna, con un 45% de contenido total de carbohidratos. La enzima mostró tener actividad coagulante sobre plasma citratado y fibrinógeno. También mostró actividad amidásica sobre BApNA y Chromozym TH. La potencia coagulante sobre fibrinógeno bovino fue equivalente a 131 unidades NIH de trombina/mg. La enzima es inhibida por PMSF y por el inhibidor de tripsina de soya calificándola como una serinoproteasa; el pH óptimo para la actividad amidolítica fue de 8,0 y es estable hasta los 40°C. Se demostró mediante inmunoelectroforesis e inmunodifusión la antigenicidad de la enzima frente al suero antibotrópico polivalente, así como su neutralización probada sobre plasma citratado (Dosis eficaz: 250 µl de antiveneno/ mg de enzima).

  • English

    A thrombin- like enzyme, barnetobin, was purified from Bothrops barnetti, peruvian snake venom using CM Sephadex C-50 followed by Sephadex G-100, in both two cases with 0,05 M amonium acetate buffer pH 5,0. The enzyme was purified 45 fold with 14% of yield and the PAGE-SDS showed only protein band of 52 kDa under reducing condition with 2β- mercaptoetanol and 48 kDa under non reducing condition indicating that the enzyme has a single polypeptide chain with disulfide bond. The PNGase treatment showed that it is a basic glycoprotein containing 45% total carbohydrates. The enzyme has coagulant activity on fibrinogen and citrated plasma and amidolytic activity on BApNA and Chromozym TH. The coagulant potency was equivalent to 131 NIH thrombin Units/ mg. In addition the enzyme is inhibited by PMSF and soybean trypsin inhibitor suggesting that is a serine proteinase. The enzyme had optimal amidolytic activity pH was 8,0 and is stable until 40 ºC. The antigenicity and neutralization of enzyme was demonstrated by inmunodiffusion and inmunoelectrophoresis with the polyvalent antibothropic serum on citrated plasma (Effective Doses: 250 µl of antivenom/ mg of enzyme).