Algunas propiedades cinéticas de una L-aminoácido oxidasa purificada del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox "Jergón"

• Nora Ruiz ^[1] ; Christian Solís ^[1] ; Gustavo A. Sandoval ^[1] ; Fanny Lazo ^[1] ; Edith Rodríguez ^[1] ; Armando Yarlequé ^[1]
  1. [1] Universidad Nacional Mayor de San Marcos

     Universidad Nacional Mayor de San Marcos

     Perú

     
• Localización: Revista de la Sociedad Química del Perú, ISSN-e 2309-8740, ISSN 1810-634X, Vol. 76, Nº. 3, 2010, págs. 218-226
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Some kinetic properties of a L-amino acid oxidase isolated from Bothrops atrox peruvian snake venom "Jergón"
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  • español

    Se han determinado las principales propiedades cinéticas de una L-aminoácido oxidasa (L- AO) purificada del veneno de B. atrox, usando diferentes aminoácidos como sustratos, tales como: L-leucina, L-fenilalanina, L-metionina y L-arginina. Previamente se establecieron las curvas de pH óptimo para L-AO en función de cada aminoácido y luego se calcularon los valores de Km, Vmax, Kcat y Kcat/Km a pH 7,5 y 8,5. Asimismo, se determinaron los valores de Ki al emplearse inhibidores específicos tales como: ácido antranílico, ácido benzoico, ácido sulfanílico y ácido salicílico. Entre los sustratos ensayados a pH 8,5, la L-AO presentó mayor actividad específica sobre L-fenilalanina, y luego sobre L-leucina, L-metionina y L-arginina, siendo los valores de pH óptimo de 8,1 con L-metionina; 8,9 con L-arginina, y 8,2 con L- fenilalanina. De acuerdo a la eficiencia catalítica, la L-leucina fue el mejor sustrato a 7,5 (Kcat/k m = 40,90 x 10(4) s-1 M-1) y pH 8,5 (Km y Vmax (Kcat/k m = 71,21 x 10(4) s-1 M-1). Asimismo, en los estudios de inhibición enzimática se encontró que el ácido antranílico tuvo el menor valor de Ki (0,008 mM), ajustándose al modelo de inhibición no competitiva, en tanto que el ácido benzoico fue considerado un inhibidor competitivo y los ácidos salicílico y sulfanílico se comportaron como inhibidores de tipo mixto.

  • English

    We have determined main kinetic properties of a L-amino acid oxidase (L-AO) purified from Bothrops atrox venom, on different aminoacids as L-leucine, L-phenylalanine, L-methionine and L-arginine. Previously optima pH curves were establish for each aminoacid and then Km, Vmax, Kcat y Kcat/Km values at pH 7,5 and 8,5 were calculated. Furthermore Ki values using anthranilic, benzoic, sulphanylic and salycilic acids were obtained. Between substrates assayed at pH 8,5, L-AO showed higher specific activity on L-phenilalanine, followed by L- leucine, L-methionine and L-arginine, being optimum values of 8,1 for L-metionine, 8,9 for L-arginine, and 8,2 for L-fenilalanine. According to catalytic efficiency, L-leucine was the best substrate at pH 7,5 (Kcat/k m = 40,90 x 10(4) s-1 M-1) and 8,5 (Kcat/k m = 71,21 x 10(4) s-1 M-1). On the other hand, enzymatic inhibition assays showed that anthranilic acid had the lowest Ki value (0,008 mM), fitting it to a non-competitive model. Benzoic acid was considered a competitive inhibitor, while salicylic and sulphanylic acid showed mixed-type inhibition.