Resumen de Identificación y expresión diferencial del factor de transcripción asociado a microftalmia en corazón y cardiomiocitos aislados de cobayo, posible papel en hipertrofia y en viabilidad

Luis Alberto Gómez Grosso, María Luz Gunturiz

• español

  Introducción. El factor de transcripción asociado a microftalmia (MITF) regula la expresión de genes específicos y no se conoce su expresión y su función a nivel cardiaco.Objetivo. Identificar la expresión de MITF en corazón y en cardiomiocitos aislados de cobayo, describir cambios morfológicos asociados con su disminución y evaluar niveles relativos de su expresión en cardiomiocitos aislados en condiciones de preacondicionamiento isquémico.Materiales y métodos. El análisis de expresión relativa de la isoforma específica cardiaca, MITF-H, se determinó por PCR en tiempo real semicuantitativa, secuenciación y western blot. La disminución del mRNA de MITF se indujo con un shRNAi específico. El tamaño, el diámetro y número de fibras musculares se evaluó por observación directa microscopía de luz.Resultados. Se amplificó un fragmento de 281 pb de cDNA, el análisis de la secuencia confirmó la identidad del exón 1 y la isoforma H de MITF. La interferencia del mRNA de MITF se asoció con un mayor  índice cardiaco (peso corazón/peso corporal 5,46x10-3 vs 4,6x10-3) y un incremento del diámetro de las fibras cardiacas (50,2±16 μm vs 38,7±14,7 μm p<0.05, n= 150). En cardiomiocitos aislados en condiciones de preacondicionamiento isquémico, se observó una expresión relativa mayor de MITF-H, que en miocitos en normoxia y expuestos a lesión por isquemia simulada (ochenta y cien veces más n=5, p< 0,05 n=3).Conclusión. Los resultados sugieren que MITF-H podría estar involucrado en hipertrofia, en la respuesta al estrés por isquemia y en la supervivencia de cardiomiocitos de cobayo. 

• English

  Introduction: The microphthalmia-associated transcription factor (MITF) regulates the expression of specific genes and its cardiac expression and function is not known.Objectives: To identify the expression of MITF in hearts and isolated cardiomyocytes from Guinea pigs, to describe morphological changes associated with mRNA interference of MITF and to evaluate their relative changes in expression in isolated cardiomyocytes under ischemic preconditioning.Materials and methods: The cardiac specific isoform, MITF-H, and relative expression level analysis, was determined by semi-quantitative real time PCR, sequencing and Western blotting. Reduction of mRNA-MITF-H was induced by transduction of specific-MITF-shRNAi interference. The cardiac morphological changes, diameter and number of cardiac fibers were evaluated by direct observation and light microscopy. Results: A cDNA fragment of 281 bp was amplified from heart and isolated ventricular cardiac myocytes. Sequence analysis confirmed the identity of the isoform MITF-H, exon 1. The MITF silencing was associated with an increase in cardiac index (heart weight/body weight vs. 5.46 x 10-3 vs 4.6 x 10-3) and higher diameter of cardiac fibers (50.2±16 μm vs 38,7±14,7 μm p<0.05, n=150). In isolated cardiac myocytes under ischemic preconditioning we observed a higher relative expression compared with that measured in myocytes exposed to normoxia and simulated ischemia (eighty and one hundred times, p <0.05, n = 5).Conclusion. The results suggest that MITF-H isoform may be involved in Guinea pig cardiac hypertrophy, response to stress by ischemia and cardiomyocytes survival.