Resumen de Implementación de la técnica de PCR enla identificación de Babesia ssp en equinos

Danilo Vargas, Rafael Bonet, Paulina Oliva, Sergio Campano

• español

  Aunque las técnicas de referencias citadas por la USDA y OIE son IFI y FC, para el diagnóstico de las infecciones por Babesia equi y Babesia caballi, éstas no permite la diferenciación entre las especies y no descartan resultados falsos negativos. La implementación de la PCR como técnica directa, en la identificación y carac-terización de estos parásitos, sin duda constituye un soporte al diagnóstico clínico de la piroplasmosis equina. Dado lo anteriormente expuesto en el presente trabajo se estandarizó la PCr para la identificación de B. equi y B. caballi. El procedimiento contempló la implementación de un protocolo de extracción de DNA, a partir de muestras de sangre y la optimización de PCR, tanto para la mezcla de reacción como para el programa de termociclación, junto a 4 partidores: P1 y P2 para B equi y P3 y P4 para B caballi. Ambos amplifican en forma selectiva una secuencia conservada de los genes de 16S rDNA, equivalentes a 659 bp para B. caballi y 664 bp para B. equi. La sensibilidad técnica fue de 0,1ng/ml para B. equi y 1ng/ml para B. caballi. El estudio de especificidad técnica no mostró productos de amplificación al utilizar DNAs de Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi, Echinococcus granulosus, Fasciola hepatica. Se estudiaron 77 muestras de sangre de equinos provenientes de la Región Metropolitana de Chile con y sin sospecha clínica, de las cuales 15 resultaron positivas (14 a B. equi y 1 a B. caballi). Nuestros resultados crearon la necesidad de una evaluación epidemiológica de la PCR y su confrontación con otras técnicas de diagnóstico directo, para lo cual en la actualidad se estudian muestras de sangre equina con sospecha a piroplasmosis

• English

  Babesia equi and Babesia caballi are intraerythrocytic protozoan parasites transmitted by ticks, causing equine babesiosis. Although the reference techniques recommended by USDA and OIE are IFAT and CF, they yields falsenegative results and don´t let differentiate between babesia´s species. The implementation of polymerase chain reaction (PCR) as a direct technique for the identification and characterization of these parasites, without doubt enrich the clinical diagnosis of babesiosis. . For all those reasons in the present report was estandarizated PCR for the identification of B. equi and B. caballi. The proceeding included blood DNA extraction protocol and the PCR optimization for the reaction mix and the termocyclig program, with four primers asigned P1 and P2 for B. equi and P3 and P4 for B. caballi. Both amplified in a selective way a conserved regions from the 16S rRNA genes (rDNA) of 659 bp for B. equi and 664 bp for B. caballi. The minimal amount of DNA detected from positives controls was 0,1 ng/ml for B. equi and 1ng/ml for B. caballi. The primer set chosen do not produced amplifications fragments using others DNAs, like Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi, Echinococcus granulosus, Fasciola hepatica. 77 horse blood specimens from Metropolitan Region, were tested for B. equi and B. caballi by PCR, 62 samples were negatives and 15 positives (14 to B. equi and 1 to B. caballi). With the aim of developing epidemiological studies, comparison PCR and microscopy, we are testing horse blood samples with suspicious of babesiosis