Resumen de Estandarización y validación de un método de cromatografía líquida de alta eficiencia con detector de arreglo de diodos (HPLC-DAD) para la determinación de niveles sanguíneos de voriconazol

Juan D. Zapata, Diego H. Cáceres, Luz E Cano, Catalina de Bedout, Sinar D. Granada, Tonny W. Naranjo

• español

  Introducción. Hasta la fecha, Colombia no cuenta con un servicio especializado de medición de niveles séricos de antifúngicos, procedimiento esencial para el adecuado seguimiento del tratamiento de infecciones fúngicas invasoras.Objetivo. Estandarizar y validar un protocolo –simple, sensible y específico– basado en la aplicación de cromatografía líquida de alta eficiencia acoplada con un detector de arreglo de diodos para la cuantificación de los niveles séricos de voriconazol.Materiales y métodos. Se usó un equipo HPLC-Agilent™, serie-1200, con un detector UVDAD, una columna analítica Eclipse-XDB-C18 y una pre-columna Eclipse-XDB-C18, ambas de la marca Agilent. Como control primario se utilizó voriconazol y como control interno, posaconazol. La validación se hizo cumpliendo todos los criterios de aceptación recomendados por la Food and Drug Administration (FDA).Resultados. Las mejores condiciones cromatográficas se obtuvieron con los siguientes parámetros: temperatura de la columna de 25 °C, detección UV-VWD de 261 nm, volumen de inyección de 50 μl, flujo de 0,8 ml/minuto y un tiempo de corrido de 10 minutos. La fase móvil usada fue acetonitrilo:agua (60:40) y los tiempos finales de retención fueron de 3,13 para voriconazol y de 5,16 minutos para posaconazol. El rango de cuantificación fue desde 0,125 μg/ml hasta 16 μg/ml.Conclusiones. La selectividad y la pureza de la señal cromatográfica, así como los límites de detección y cuantificación estandarizados hacen de esta metodología una excelente herramienta para el seguimiento terapéutico de pacientes tratados con voriconazol o en profilaxis con este fármaco.

• English

  Introduction. A specialized service for antifungal blood level determination is not available in Colombia. This service is essential for the proper follow-up of antifungal therapies.Objective. To standardize and validate a simple, sensitive, and specific protocol based on high-performance liquid chromatography with a diode array detector for voriconazole blood level quantification.Materials and methods. We used an Agilent HPLC™ series-1200 equipment with a UVdiode array detector with an analytical column Eclipse XDB-C18 and pre-column Eclipse-XDB-C18 (Agilent). We used voriconazole as the primary control and posaconazole as an internal control. We performed the validation following the Food and Drug Administration (FDA) recommendations.Results. The best chromatographic conditions were: Column temperature of 25°C, UV variable wavelength detection at 256 nm for voriconazole and 261 nm for posaconazole (internal standard); 50 μl of injection volume, 0,8 ml/min volume flow, 10 minutes of run time, and mobile phase of acetonitrile:water (60:40). Finally, retention times were 3.13 for voriconazole and 5.16 minutes for posaconazole. Quantification range varied from 0.125 μg/ml to 16 μg/ml.Conclusion. The selectivity and chromatographic purity of the obtained signal, the detection limits, and the standardized quantification make this method an excellent tool for the therapeutic monitoring of patients treated with voriconazole.