Resumen de La preparación de ADN de referencia para estudios genotípicos
David Lovannisci, Claire Gibson, Hugo Espín, Edward Lammer
El objetivo de este laboratorio de investigación es comprender las interacciones que existen entre el medioambiente con el componente genético , y a su vez entender como estos podrían incrementar el riesgo de malformaciones congénitas. Como parte de ese esfuerzo , el laboratorio de investigaciones de defectos genéticos del C.H.O.R.I. (Birth Defects Research Laboratory Children's Hospital Oakland Research Institute ) ha estado llevando a cabo un estudio de caso-control que incorpora genotipificación de casos y controles en polimorfismos de posibles genes involucrados en el problema. Para llevar a cabo estos objetivos las nuevas técnicas de genotipificación desarrolladas son periódicamente evaluadas. Un panel de ADNs humanos se hace necesarios para servir como material de referencia, tanto para el desarrollo de nuevas formas de genotipificación como para servir como controles positivos para las variantes menos comunes de los polimorfismos en estudio. El objetivo en este reporte fue establecer una base de datos que servirá como referencia, utilizando sangre de donadores voluntarios. A estas personas se las genotipificó en los polimorfismos de los genes de nuestro interés. La sangre fue tomada de 29 donantes voluntarios. El ADN fue extraído bajo la técnica de precipitación con sales (salting out). Luego se realizó amplificación por técnica de PCR de los diferentes fragmentos que contenían los fragmentos de interés. A continuación el ADN fue digerido por enzimas de restricción para establecer los polimorfismos. Las bandas resultantes fueron separadas por electroforesis en gel. Los genotipos obtenidos fueron establecidos y luego introducidos en una base de datos computarizados para futuras referencias.
