Estimación de dosis génica mediante PCR-múltiplex y electroforesis capilar fluorescente en posibles portadoras de deleciones en el gen de la distrofina, Costa Rica 1998- 2000

• Jorge Azofeifa ^[1] ; Vanessa M. Sancho-Fernández ^[1]
  1. [1] Instituto de Investigaciones en Salud
• Localización: Acta Pediátrica Costarricense, ISSN-e 1409-0090, Vol. 15, Nº. 2, 2001, págs. 64-77
• Idioma: español
• Enlaces
  • Texto completo
• Resumen
  • español

    Objetivo Estimar la dosis génica en el gen de la distrofina a mujeres a riesgo de ser portadoras de deleciones. Sitio de realización INISA y Escuela de Biología, Universidad de Costa Rica. Materiales y métodos Se obtuvo ADN de 15 mujeres, emparentadas por línea materna con pacientes afectados con DMD o BMD causadas por deleciones en el gen de la distrofina, y que por lo tanto podrían ser portadoras de esas mutaciones, para amplificar de 7 a 9 regiones del gen por medio de PCR-múltiplex. Para estimar la dosis génica, se marcó uno de los imprimadores (el F) de cada par con el fluorocromo 6-FAM; los productos de amplificación se separaron y se cuantificaron por electroforesis capilar fluorescente. Resultados Todas las posibles portadoras mostraron dosis génicas como las de mujeres sin deleciones. Conclusiones El resultado indica que todos los pacientes son producto de mutaciones de novo, lo que es inesperado, pues datos de otros países muestran que ese es el caso de a sólo 113 de los pacientes. Además, la evaluación ofrece mejores elementos de juicio para brindar consejo genético.

  • English

    Objective To quantitate gene doses at the dystrophin locus in women at risk of being carriers of deletions. Place where the work was performed: INISA and Escuela de Biología, Universidad de Costa Rica. Materiais and methods. Fifteen women were identified in a previous study to be at increased risk of being carriers of deletions at the dystrophin gene -they are first-degree relativas of patients suffering from DMD/BMD which owe their affection to deletions at the gene. DNAs of these women were used to amplify 7 to 9 regions of the gene by PCR-multiplex. To estímate gene doses the Fprimer of each pair was labeled with 6-FAM and the amplification products were separated and quantitated by fluorescent capillar electrophoresis. Results None of the 15 putative carriers showed evidence of carrying the deletions that affect the index patients in their families. Conclusions All index patients in the families of the carriers analyzed are affected by de novo mutations, an unexpected result according to data of other countries. The data add another, very valuable criterion to offer genetic counseling to the putative carriers.