Resumen de Análisis y Clonación del Gen catE de Bacillus Licheniformis M2-7

Rigoberto Mozo Mejía, Augusto Rojas Aparicio, Miguel Ángel Rodríguez Barrera, Carlos Ortuño Pineda, Yanet Romero Ramírez

• español

  En Bacillus licheniformis M2-7 el gen catE codifica para la posible proteína catecol 2, 3-dioxigenasa, relacionada con la biodegradación de hidrocarburos, confiriéndole mecanismos de resistencia contra estos compuestos. En los últimos años, el desarrollo de organismos genéticamente modificados (OGM) y la biorremediación utilizan esta nueva tecnología potenciando las características metabólicas y logrando una degradación de agentes contaminantes más eficiente. Para establecer estrategias de biorremediación, se debe conocer los procesos metabólicos implicados y los genes que codifican las proteínas relacionadas. Este trabajo se centra en analizar y clonar el gen catE de B. licheniformis M2-7 en un plásmido para confirmar su función en la utilización de hidrocarburos. Para ello se extrajo el ADN cromosomal, se amplificó un fragmento del gen catE mediante PCR y se clonó en el vector pJET1.2/blunt, la transformación se realizó E. coli DH5. La construcción del plásmido recombinante se confirmó mediante PCR y digestión con EcoRV. Mediante esta metodología se logró diseñar el plásmido pCAT derivado del vector pJET1.2/blunt, llevando un fragmento del gen catE de B. licheniformis M2-7, plásmido que se encuentra en la cepa RMJ de E. coli, lo que permitirá utilizarla como herramienta molecular para generar una mutante en dicho gen en B. licheniformis.

• English

  In Bacillus licheniformis M2-7 the catE gene codes for the possible protein catechol 2, 3-dioxygenase, related to the biodegradation of hydrocarbons, conferring resistance mechanisms against these compounds. In recent years, the development of genetically modified organisms (GMOs) and bioremediation use this new technology, enhancing metabolic characteristics and achieving more efficient degradation of contaminating agents. To establish bioremediation strategies, one must know the metabolic processes involved and the genes that encode related proteins. This work focuses on analyzing and cloning the catE gene from B. licheniformis M2-7 in a plasmid to confirm its function in hydrocarbon utilization. To do this, the chromosomal DNA was extracted, a fragment of the catE gene was amplified by PCR and cloned into the pJET1.2/blunt vector, the transformation was carried out in E. coli DH5. The construction of the recombinant plasmid is confirmed by PCR and digestion with EcoRV. Using this methodology, it was possible to design the pCAT plasmid derived from the pJET1.2/blunt vector, carrying a fragment of the catE gene from B. licheniformis M2-7, a plasmid stored in the RMJ strain of E. coli, which will allow it to be used as molecular tool to generate a mutant in said gene in B. licheniformis.