Investigação e desenvolvimento de imunoensaios comparativos para produção de imunoglobulinas contra veneno da cobra (Bungarus sindanus) em aves

• Sobia Yaseen ^[1] ; Aleem Ahmed Khan ^[1]
  1. [1] Bahauddin Zakariya University

     Bahauddin Zakariya University

     Pakistán

     
• Localización: Ciencia rural, ISSN 0103-8478, Vol. 54, Nº. 2, 2024
• Idioma: portugués
• Títulos paralelos:
  • Antivenom production in chicken against Sind krait (Bungarus sindanus) venom and its efficacy assessment using different immunoassays
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• Resumen
  • português

    O presente estudo teve como objetivo a detecção, purificação, quantificação do soro antiofídico em ovos de galinha e determinar a eficácia do soro antiofídico extraído em camundongos. Os três grupos de galinhas foram imunizados por doses subletais de veneno de cobra Sindhi krait com óleo de parafina adjuvante + lecitina. As doses de reforço foram injetadas por via subcutânea nos músculos do peito em vários locais após cada duas semanas até oito semanas. Anticorpos-IgY produzidos contra o veneno de Krait foram purificados da gema de ovo pelo método de precipitação com PEG-6000. Os conteúdos de proteína antiveneno-IgY purificada foram quantificados por fotômetro nanodrop enquanto a pureza foi acessada por SDS-PAGE. A especificidade do antiveneno-IgY foi verificada pelo método de Ochterloneys e o título foi estimado por ELISA indireto. A eficácia do antiveneno foi avaliada em camundongos albinos. A IgY purificada exibiu uma única banda de proteína 180-190 KDa em SDS-PAGE sob condição não reduzida e duas bandas 63 - 65 KDa e 22 - 25 KDa correspondentemente condição sub-reduzida. A imunodifusão exibiu linhas de precipitação nítidas de imunocomplexo (veneno e IgY extraída). Em todos os grupos (G1, G2 e G3) o nível do soro aumentou acentuadamente da 3ª para a 4ª semana e manteve-se a partir daí. G2 e G3 apresentaram títulos elevados até diluições de 1:2048, enquanto G1 apresentou diluições de até 1:1024, testado por ELISA indireto. No ensaio de neutralização, a dose ED50 de antiveneno G2 e G3 obtida foi de 400,23ug/camundongos para mais de duas vezes a LD50 e 100% de proteção foi @ 508,84ug/camundongos que neutralizam completamente a dose altamente letal de veneno. Mas G1 ED50 foi de 405,66ug/camundongos e forneceu 100% de proteção @ 554,21ug/camundongos. Antivenenos extraídos, contra veneno de Bungarus sindanus eram altamente puros, seu título de anticorpos e capacidade de neutralização foram produzidos com sucesso a partir de gemas de ovos de galinhas imunizadas pela primeira vez no Paquistão

  • English

    Present study aimed for detection, purification, quantification of Sind Krait (Bungarus sindanus) antivenom from chicken eggs and to determine extracted antivenom efficacy in mice. Hens’ three groups were immunized by sub-lethal doses of Sind Krait venom with adjuvant paraffin oil+lecithin. Booster doses were injected subcutaneously on pectorals muscles at multiple sites after every two weeks upto eight weeks. Antibodies-IgY produced against Sind Krait venom was purified form eggs’ yolk by precipitation method with PEG-6000. Purified antivenom-IgY protein contents were quantified by Nanodrop-photometer, purity accessed by SDS-PAGE, specificity checked by Ochterloneys method and titer estimated by indirect ELISA. Antivenom efficacy was assessed in albino mice. Purified antivnom-IgY exhibited single protein band 180-190 kDa on SDS-PAGE under non-reduced condition and two-bands 63 - 65 kDa and 22 - 25 kDa correspondingly under-reduced condition. Immunodiffusion exhibited sharp precipitation lines of immune-complex (venom and extracted-IgY). In all groups (G1, G2 and G3) antivenom level sharply increase from 3rd to 4th week and maintained thereafter. G2 and G3 presented high titer upto 1:2048 dilutions, while G1 showed upto 1:1024 dilutions, as tested by indirect ELISA. In neutralization assay ED50 dose of G2 and G3 obtained antivenom was 400.23 µg/mice for more than twofold LD50 dose of venom and 100% protection was at 508.84 µg/mice that completely neutralized highly lethal dose of venom. But G1 ED50 was 405.66 µg/mice and provides 100% protection at 554.21 µg/mice. Extracted antivenom, against Sind Krait venom were highly pure, and with high neutralization capacity were produced successfully from eggs yolk first time in Pakistan