Resumen de Estudio multicéntrico argentino de detección y seguimiento de clones de hemoglobinuriaparoxística nocturna (HPN) por citometría deflujo multiparamétrica (CFM) de alta resolución

Nora Halperin, Alejandra Marcela Altube, E. Agriello, C. Caride, A. Galeano, S. Galeazzi, J. Pavón, J. López, J. Palazzi, P. Iommi, C Malusardi, D. Carelli, C. Rodriguez, E. Ledesma, J. Correa, E. Ramis, R. Guevara, V. Novoa

• español

  La HPN es una enfermedad clonal adquirida, no maligna, que se origina por mutación del gen PIGA en una célula progenitora hematopoyética, lo que de-termina la ausencia total o parcial de múltiples pro-teínas que se unen a la membrana a través del ancla glicosilfosfatidilinositol (GPI). Nuevas estrategias de análisis y nuevas moléculas permiten una mayor sensibilidad en la detección de clones pequeños. Nuestro objetivo fue estudiar la incidencia de clones HPN por CFM en distintos centros del país y des-tacar la ventaja de protocolos estandarizados, con nuevas moléculas, en la detección de clones HPN al diagnóstico. Para ello se analizaron 832 muestras de sangre periférica (SP) pertenecientes a pacientes de 8 laboratorios de distintos puntos geográficos, del año 2013 al 2017, que habían sido evaluados para la identificación de clones HPN por citometría de flujo. Los clones HPN fueron identificados y cuantificados en la población de neutrófilos y monocitos según la expresión de moléculas ancladas por GPI como CD14, CD66b, CD24, CD157, CD16 y FLAER y en los glóbulos rojos (GR) seR) según la expresión de CD59. Se evaluaron 832 muestras, en 189 (22,72%) se hallaron clones HPN. Los diagnósticos presuntivos fueron de: HPN en 279 muestras (33,53%), aplasia medular en 73 (8,77%), citopenias en 131 (15,75%), trombosis en lugares atípicos en 83 (9,98%), anemias en 170 (20,43%) y en 96 muestras no se especificó el diagnóstico (11,54%). Los clones más pequeños (≤10%) representaron el 8,65% de las muestras (72/832) y fueron hallados con mayor frecuencia en pacientes con sospecha diagnóstica de aplasia medular (36,11%), citopenias (25,00%), y HPN (22,22%). Los clones medianos (>10%-≤50%), detectados en 3,85% de las muestras (32/832), tuvieron principalmente sospecha de HPN. Los clones >50%, -10,22% de las mues-tras (85/832)- se encontraron fundamentalmente en HPN. Se observó un aumento en el número de pesquisas en pacientes con diferentes citopenias con respecto a años anteriores, con hallazgos de clones pequeños, gracias a los nuevos protocolos, que mostraron mayor sensibilidad y especificidad. En cuanto a la gestión del proceso de comunicación entre médico-bioquímico, se destaca una disminución en el porcentaje de pacientes que venían sin diagnóstico (41% al 2013, a 11,54% al 2017). Esto ayuda en la interpretación de los resultados y en el conocimiento de la enfermedad.

• English

  Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) is a non-malignant acquired clonal disease caused by a mutation in the PIGA gene of hematopoietic stem cells, which causes a total or partial absence of GPI anchored proteins in the cell membrane. New analytic strategies and new molecules allow an in-creased sensibility to detect of small PNH clones. Our aim was to study the incidence of PNH clones using MFC in different centres around the country and to highlight the advantages of standardized protocols using new molecules in the detection and diagnosis of PNH clones. To do this, 832 peripheral blood (PB) samples that had been scanned for PNH clones using flow cytometry (from 2013 until 2017) from 8 laboratories in different geographical areas of the country were analysed. PNH clones were identified and quantified in neutrophils and monocytes based on the partial or total expression absence of GPI anchored proteins such as CD14, CD66b, CD24, CD157, CD16 and FLAER, and in red blood cells (RBC) based on the absence of CD59. PNH clones were found in 189 (22.72%) of the 832 samples tested. Clinical suspicions were: PNH in 279 samples (33.53%), marrow aplasia in 73 (8.77%), cytopenia in 131 (15.75%), thrombosis of atypical location in 83 (9.98%), anemia in 170 (20,43%) and 96 without diagnosis (11.54%). The smallest clones (≤10%), detected in 8.65% of the samples (72/832), were found to have a larger incidence in patients with clinical suspicion of: bone marrow aplasia (36.11%), cytopenias (25.00%) and PNH (22.22%). Medium clones, >10-≤50, 3.85% of the samples (32/832), were found to have a larger incidence in samples with clinical suspicion of PNH. The clones >50, 10.22% of the samples (85/832), were found mostly in PNH. An increase in the number of positive results by detection of small clones was observed in patients with different cytopenias thanks to the new protocols, showing a higher sensibility and specificity. Regarding the management of the doctor-biochemist communication process, in the last 4 years a considerable improvement reporting patient information was observed. The percentage of patients without a diagnosis decreased drastically (from 41% in 2013 to 11.54% in 2017). This is of significant help in the interpretation of results and in gaining a better understanding of the disease